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BY-0569 NRK-52E大鼠腎上皮細胞系

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NRK-52E大鼠腎上皮細胞系
NRK-52E大鼠腎上皮細胞系作為源自大鼠腎臟近曲小管的上皮細胞模型,因保留腎臟近曲小管的重吸收功能及代謝特性,在腎臟損傷修復機制、腎小管功能調控及腎臟疾病病理研究中具有重要價值,成為探究腎臟近曲小管生理功能及相關疾病的關鍵實驗工具。
細胞特性與來源背景:該細胞系源自大鼠腎臟近曲小管組織,經原代培養(yǎng)和純化獲得。細胞形態(tài)呈上皮樣,多為立方形或多邊形,胞體大小均勻(直徑約 16-20μm),胞質豐富且呈嗜酸性,可見較多的線粒體和內質網,細胞核呈圓形,位于細胞中央,核仁清晰。生長方式為貼壁生長,呈單層鋪路石樣排列,具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象,傳代后 24 小時貼壁率達 93%。核心參數(shù)表現(xiàn)出正常腎上皮細胞特征:倍增時間約 58 小時,連續(xù)傳代 20 次后仍保持穩(wěn)定的生物學特性;表面標志物表達du特,細胞角蛋白 18(CK18)陽性率達 96%,近曲小管標志物 γ- 谷氨酰轉肽酶(GGT)陽性率 94%,上皮細胞黏附分子(EpCAM)陽性率 92%;具有正常的二倍體核型(染色體數(shù) 42 條),無染色體畸變;能主動吸收葡萄糖和氨基酸,葡萄糖轉運速率達 30nmol/(h?mg 蛋白),氨的生成量達 25μmol/(h?10?細胞);可分泌腎素,基礎分泌量達 18ng/mL,在血管緊張素 Ⅱ 刺激下分泌量增加 2.3 倍;無微生物污染,細胞純度達 97%,保障實驗結果的可靠性。
科研應用價值:在腎臟損傷修復研究中,NRK-52E 細胞經過氧化氫(H?O?)處理 24 小時后,凋亡率增加 40%,炎癥因子 IL-1β 分泌量提升 4.5 倍,細胞遷移速率下降 35%;經表皮生長因子(EGF)處理后,增殖活性提升 50%,遷移速率增加 60%,可模擬腎臟氧化損傷及修復過程,為解析腎臟損傷修復機制提供理想模型。
在腎小管功能調控研究方面,該細胞經醛固酮處理 48 小時后,鈉鉀 ATP 酶活性增強 3.2 倍,鈉離子重吸收量增加 45%,水通道蛋白 1(AQP1)表達量提升 40%,可模擬醛固酮對腎小管重吸收功能的調控過程,適用于探究腎小管水鈉代謝調節(jié)機制。
腎臟疾病研究領域,該細胞經高糖(30mM)處理后,細胞外基質蛋白 Ⅰ 型膠原蛋白分泌量增加 2.8 倍,轉化生長因子 -β1(TGF-β1)表達量提升 55%,細胞出現(xiàn)纖維化樣改變,能很好地模擬糖尿病腎病中腎小管的病變過程,為探究糖尿病腎病的發(fā)病機制提供實驗基礎。此外,該細胞與腎間質成纖維細胞共培養(yǎng)時,成纖維細胞的 α- 平滑肌肌動蛋白表達量增加 3 倍,可用于探究腎小管 - 間質相互作用在腎纖維化中的調控機制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范:推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,添加 2mM 谷an酰胺、1% 非必需氨基酸及 1% 抗生素混合液,培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2 天更換一次,以維持細胞的正常代謝功能。傳代時,用 PBS 沖洗細胞 2 次,加入專用細胞解離液,37℃孵育 8-10 分鐘,待細胞間隙增大后輕輕吹打使細胞脫落,傳代比例為 1:3-1:4,每 4-5 天傳代一次,避免過度傳代導致功能異常。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液,細胞濃度調整為 4×10?個 /ml,經程序降溫(-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮保存)后,復蘇存活率達 86% 以上,2-3 代內可恢復正常的生長和功能。運輸采用干冰冷凍運輸或培養(yǎng)瓶活細胞運輸,收到細胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時,更換培養(yǎng)基后觀察細胞形態(tài),確認無異常漂浮物且排列整齊后進行實驗。該細胞系僅限科研使用,操作時需避免頻繁更換培養(yǎng)條件,以防影響其代謝功能。
NRK-52E 大鼠腎上皮細胞系以其穩(wěn)定的近曲小管特性、完整的重吸收功能及典型的腎臟代謝活性,在腎臟生物學研究與腎臟疾病機制探索中發(fā)揮著重要作用,為揭示腎臟疾病的發(fā)病機制和開發(fā)新型治療藥物提供了可靠的細胞模型。

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