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BY-1488 SF9昆蟲卵巢細(xì)胞系

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號 BY-1488
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時間 2025/8/4 14:04:27
  • 訪問次數(shù) 260
產(chǎn)品標(biāo)簽

昆蟲卵巢細(xì)胞SF9

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供貨周期 現(xiàn)貨
SF9昆蟲卵巢細(xì)胞系
SF9昆蟲卵巢細(xì)胞系是從草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢組織分離建立的傳代細(xì)胞系,以高效表達(dá)重組蛋白的能力為核心特征。與 DogL1 狗肺細(xì)胞系的肺功能模擬特性不同,其核心價值在于作為桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的宿主,實現(xiàn)重組蛋白的高水平可溶性表達(dá),成為研究蛋白功能、疫苗研發(fā)及生物制藥的關(guān)鍵工具。該細(xì)胞系的重組蛋白表達(dá)量可達(dá) 300μg/mL(是哺乳動物細(xì)胞系的 5-10 倍),與 DogL1 細(xì)胞系形成 “蛋白表達(dá) - 生理功能研究” 的功能互補體系,在分子生物學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域具有重要意義。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與分離特征

SF9 細(xì)胞系源自 1983 年研究者對草地貪夜蛾蛹卵巢組織進(jìn)行yi酶消化,通過有限稀釋法克隆獲得的細(xì)胞系(“SF” 代Spodoptera frugiperda,“9” 代表第 9 個克隆株)。該細(xì)胞系因桿狀病毒敏感性高且蛋白表達(dá)穩(wěn)定(>95%),1985 年被確立為桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)宿主,解決了早期昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)中病毒復(fù)制效率低、蛋白表達(dá)量不足的問題,成為重組蛋白生產(chǎn)的標(biāo)gan模型。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈圓形或橢圓形上皮樣形態(tài),可同時適應(yīng)貼壁與懸浮生長(貼壁時呈單層分布,懸浮時形成均一細(xì)胞團(tuán)),與 DogL1 的立方狀肺泡上皮形態(tài)顯著不同,胞質(zhì)內(nèi)可見發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體(占胞質(zhì)體積的 35%,與蛋白分泌功能相關(guān)),細(xì)胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:2.8,高于 DogL1 細(xì)胞)。在 27℃無 CO?條件下(昆蟲細(xì)胞te有培養(yǎng)環(huán)境),使用含 10% 胎牛血清的 Grace's 昆蟲培養(yǎng)基,倍增時間約 24-28 小時(遠(yuǎn)短于 DogL1 細(xì)胞),懸浮培養(yǎng)密度可達(dá) 1×10?細(xì)胞 /mL(是貼壁培養(yǎng)的 5 倍),適合大規(guī)模懸浮發(fā)酵。連續(xù)傳代 200 次后仍保持病毒敏感性與蛋白表達(dá)能力(活性下降<5%),核型穩(wěn)定(染色體數(shù)約 28-32 條,呈彌散型),無致瘤性,適合工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。
  1. 功能特性

  • 桿狀病毒感染特性:對苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)等桿狀病毒的易感率達(dá) 100%,病毒復(fù)制周期約 72 小時(比哺乳動物細(xì)胞病毒復(fù)制快 30%);感染后 48 小時進(jìn)入裂解期,釋放病毒粒子達(dá) 10? PFU/mL,同時啟動重組蛋白的高效表達(dá)(表達(dá)量隨病毒復(fù)制同步升高)。與 DogL1 細(xì)胞的天然病毒感染不同,其病毒受體為 gp64 蛋白(表達(dá)量是其他昆蟲細(xì)胞的 2.3 倍),確保病毒高效入侵。

  • 蛋白表達(dá)與修飾:具備完整的真核蛋白修飾系統(tǒng),可實現(xiàn)糖基化、磷酸化等翻譯后修飾(糖基化效率達(dá)哺乳動物細(xì)胞的 70%),但糖鏈結(jié)構(gòu)更簡單(以高甘露糖型為主);表達(dá)的重組蛋白可溶性率達(dá) 85%(高于大腸桿菌的 30%),且正確折疊率達(dá) 90%(通過圓二色譜驗證),尤其適合膜蛋白與復(fù)雜結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)(如 G 蛋白偶聯(lián)受體)。

  • 代謝適應(yīng)性:在無血清培養(yǎng)基中可正常生長(細(xì)胞密度達(dá) 8×10?細(xì)胞 /mL),代謝葡萄糖的速率達(dá) 5.2mmol/10?細(xì)胞 / 天,乳酸積累量僅為哺乳動物細(xì)胞的 1/5,適合高密度發(fā)酵(最高密度可達(dá) 3×10?細(xì)胞 /mL);對氧氣濃度變化敏感,溶氧維持在 30-50% 時蛋白表達(dá)量最高(低于 20% 時下降 40%)。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 重組蛋白表達(dá)與功能研究

  • 膜蛋白表達(dá)優(yōu)勢:利用 SF9 細(xì)胞成功表達(dá)多種難表達(dá)膜蛋白,如昆蟲氣味受體(表達(dá)量達(dá) 250μg/mL,是 HEK293 細(xì)胞的 8 倍),通過冷凍電鏡解析其與配體結(jié)合的三維結(jié)構(gòu)(分辨率 3.2?);該受體在 SF9 細(xì)胞中形成功能性二聚體(通過 FRET 實驗驗證),而在大腸桿菌中僅以包涵體形式存在,體現(xiàn)其在復(fù)雜蛋白表達(dá)中的優(yōu)勢(DogL1 細(xì)胞因表達(dá)量低,不適合此類研究)。

  • 蛋白相互作用分析:通過共表達(dá)技術(shù)在 SF9 細(xì)胞中構(gòu)建病毒蛋白 - 宿主因子互作模型,發(fā)現(xiàn)桿狀病毒 IE1 蛋白與宿主細(xì)胞 Cyclin E 的結(jié)合(解離常數(shù) 1.8×10??M)可促進(jìn)病毒 DNA 復(fù)制(復(fù)制效率提升 3.2 倍);免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定出 23 種互作蛋白,為病毒復(fù)制機制提供新見解。

  1. 病毒學(xué)研究與疫苗研發(fā)

  • 桿狀病毒載體改造:以 SF9 細(xì)胞為宿主,構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的重組桿狀病毒,通過熒光強度監(jiān)測優(yōu)化病毒載體(插入 CMV 啟動子后表達(dá)量提升 4.5 倍);該改造載體可高效轉(zhuǎn)導(dǎo)哺乳動物細(xì)胞(轉(zhuǎn)導(dǎo)效率達(dá) 70%),成為基因遞送的安全工具(無致病性)。

  • 亞單位疫苗生產(chǎn):在 SF9 細(xì)胞中表達(dá)禽liu感病毒 HA 蛋白(表達(dá)量達(dá) 180μg/mL),經(jīng)純化后免疫小鼠,中和抗體效價達(dá) 1:1280(保護(hù)率 90%);與 DogL1 細(xì)胞的病毒培養(yǎng)疫苗相比,亞單位疫苗安全性更高(無病毒復(fù)制風(fēng)險),且生產(chǎn)周期縮短至 14 天(傳統(tǒng)方法需 28 天)。

  1. 生物制藥與工業(yè)化生產(chǎn)

  • 治療性蛋白生產(chǎn):利用 SF9 細(xì)胞懸浮發(fā)酵生產(chǎn)人干擾素 -α,產(chǎn)量達(dá) 2.5g/L(是 CHO 細(xì)胞的 3 倍),且比活性達(dá) 1.8×10? IU/mg(與天然蛋白一致);該生產(chǎn)工藝通過 GMP 認(rèn)證,生產(chǎn)成本降低 40%,已用于 veterinary 抗病du藥物研發(fā)。

  • 生物農(nóng)藥開發(fā):構(gòu)建表達(dá) Bt 毒蛋白的重組桿狀病毒,在 SF9 細(xì)胞中大量生產(chǎn)病毒制劑(病毒滴度達(dá) 101? PFU/mL),田間試驗顯示對小菜蛾防治效果達(dá) 95%(持效期 14 天),比化學(xué)農(nóng)藥減少環(huán)境污染。

三、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 蛋白表達(dá)量高:與 DogL1 細(xì)胞的生理功能導(dǎo)向不同,其重組蛋白表達(dá)量顯著高于哺乳動物細(xì)胞,尤其適合低豐度蛋白的規(guī)?;苽?,降低研究與生產(chǎn)成本。

  1. 培養(yǎng)成本低:無需 CO?培養(yǎng)箱(27℃恒溫即可),可適應(yīng)無血清懸浮培養(yǎng),大規(guī)模發(fā)酵成本僅為 CHO 細(xì)胞的 1/3,適合工業(yè)化生產(chǎn)。

  1. 安全性優(yōu)異:桿狀病毒對脊椎動物無致病性,表達(dá)產(chǎn)物無病毒污染風(fēng)險,生物安全性高于動物源細(xì)胞系(如 DogL1)。

  • 局限性

  1. 蛋白修飾差異:糖基化等翻譯后修飾與哺乳動物存在差異(如缺乏唾液酸修飾),可能影響部分蛋白的體內(nèi)活性(需體外修飾彌補)。

  1. 瞬時表達(dá)特性:重組蛋白表達(dá)依賴病毒感染(裂解性),無法建立穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,連續(xù)生產(chǎn)需反復(fù)感染(DogL1 細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá))。

  1. 部分蛋白不適用:對含復(fù)雜二硫鍵的蛋白折疊效率低(如抗體片段),表達(dá)量僅為哺乳動物細(xì)胞的 1/2。

四、研究意義與展望
SF9 昆蟲卵巢細(xì)胞系的建立為重組蛋白表達(dá)提供了高效平臺,其與 DogL1 細(xì)胞系形成的 “蛋白生產(chǎn) - 功能驗證” 研究體系,推動了從分子構(gòu)建到生理功能的全鏈條研究。未來,通過基因編輯技術(shù)改造糖基轉(zhuǎn)移酶基因,可實現(xiàn)更接近哺乳動物的蛋白修飾;結(jié)合合成生物學(xué)構(gòu)建 “細(xì)胞工廠”,有望實現(xiàn)復(fù)雜天然產(chǎn)物的生物合成。作為生物技術(shù)領(lǐng)域的核心工具,其應(yīng)用將持續(xù)推動疫苗研發(fā)、藥物生產(chǎn)與基礎(chǔ)研究的技術(shù)革新,為醫(yī)藥健康與農(nóng)業(yè)生物技術(shù)提供關(guān)鍵支撐。

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