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BY-1429 ST-2014S豬睪丸細(xì)胞懸浮適應(yīng)株細(xì)胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1429
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/1 13:42:30
- 訪問次數(shù) 206
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
懸浮適應(yīng)性與代謝特征：在無血清懸浮培養(yǎng)中，細(xì)胞聚集體直徑穩(wěn)定在 80-120μm（IPI-FX 無法懸浮生長），葡萄糖消耗率達(dá) 15mmol/10?細(xì)胞 / 天，乳酸生成率僅為貼壁培養(yǎng)的 60%，pH 緩沖能力強(qiáng)（維持在 7.2-7.4），可在生物反應(yīng)器中連續(xù)培養(yǎng) 14 天（IPI-FX 最長 7 天），為大規(guī)模病毒生產(chǎn)提供代謝基礎(chǔ)。
病毒受體表達(dá)與復(fù)制支持：高表達(dá) PRRSV 受體 CD163（陽性率 98%）和硫酸乙酰肝素（陽性率 96%），膜表面 CD163 密度達(dá) 6.8×10?分子 / 細(xì)胞（是 IPI-FX 的 5 倍）；感染 PRRSV 后，病毒復(fù)制周期縮短至 18 小時（IPI-FX 為 36 小時），胞內(nèi)病毒 RNA 拷貝數(shù)達(dá) 1011 copies/mL（IPI-FX 僅 10? copies/mL），病毒釋放效率達(dá) 80%（顯著高于 IPI-FX 的 40%）。
病毒敏感性譜：對 PRRSV 的感染效率達(dá) 99%，病毒滴度穩(wěn)定在 10?.? TCID??/mL（是 IPI-FX 的 30 倍）；對豬圓環(huán)病毒 2 型（PCV2）的支持能力同樣優(yōu)異（滴度 10?.2 TCID??/mL），但對腸道病毒（如豬流行性腹瀉病毒）敏感性低（滴度＜103 TCID??/mL），與 IPI-FX 的腸道病毒敏感性形成器官特異性差異。
PRRSV 疫苗生產(chǎn)與工藝優(yōu)化
大規(guī)模病毒增殖：在 500L 生物反應(yīng)器中，ST-2014S 細(xì)胞密度達(dá) 5×10?個 /mL 時接種 PRRSV，72 小時后病毒收獲量達(dá) 5×101? TCID??，是傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的 20 倍；采用流加培養(yǎng)模式可實(shí)現(xiàn)連續(xù) 3 次病毒收獲，總滴度提升至 1.8×1011 TCID??，目前國內(nèi) 70% 的 PRRSV 疫苗使用該細(xì)胞系生產(chǎn)。
弱毒疫苗株篩選：利用其對 PRRSV 不同毒株的敏感性差異，可通過病毒滴度比值（強(qiáng)毒 / 弱毒）快速評估減毒效果，該比值在 ST-2014S 中達(dá) 200（IPI-FX 僅 30），篩選準(zhǔn)確率提升 6 倍，顯著縮短疫苗研發(fā)周期。
抗病du藥物篩選與機(jī)制研究
高通量藥物篩選模型：建立基于熒光標(biāo)記 PRRSV 的篩選體系，某核苷類似物在 ST-2014S 細(xì)胞中對 PRRSV 的抑制率達(dá) 99%，EC??為 0.5μM（IPI-FX 中為 3μM），藥物選擇性指數(shù)（SI）達(dá) 120，是理想的抗 PRRSV 候選藥物；該結(jié)果在仔豬實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證（病毒載量下降 90%）。
病毒入侵機(jī)制解析：通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn) PRRSV 通過 CD163 介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑入侵，ST-2014S 細(xì)胞的內(nèi)吞速率是 IPI-FX 的 3 倍，且依賴網(wǎng)格蛋白（敲除后入侵率下降 85%），為靶向入侵的抗病du藥物設(shè)計(jì)提供依據(jù)。
病毒診斷試劑開發(fā)
抗原制備與標(biāo)準(zhǔn)化：ST-2014S 細(xì)胞生產(chǎn)的 PRRSV 抗原純度達(dá) 95%（IPI-FX 為 70%），經(jīng)滅活后用于 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達(dá) 1:64000，與豬血清陽性符合率達(dá) 98%（IPI-FX 抗原為 85%），被列為 PRRSV 抗體檢測的標(biāo)準(zhǔn)抗原。
病毒分離鑒定：對臨床病料中的 PRRSV 分離率達(dá) 92%（IPI-FX 僅 55%），且 24 小時內(nèi)即可觀察到細(xì)胞病變（IPI-FX 需 48 小時），使 PRRSV 確診時間從 72 小時縮短至 48 小時，顯著提升疫情處置效率。
懸浮培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基與工藝：使用無血清 CDM4CHO 培養(yǎng)基，添加 4mM 谷an酰胺和 0.1% Pluronic F-68（防止細(xì)胞聚集過大），攪拌速率控制在 80-100rpm（5L 反應(yīng)器），溶氧維持在 50%±5%；與 IPI-FX 的貼壁培養(yǎng)不同，無需包被培養(yǎng)器皿，可直接接種于搖瓶或生物反應(yīng)器。
傳代與放大：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 4×10?個 /mL 時，按 1:4 比例稀釋傳代（無需離心，直接稀釋），24 小時存活率超 95%；放大培養(yǎng)采用階梯式（100mL→500mL→2L→10L），每次放大倍數(shù)不超過 5 倍，確保細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境。
凍存與復(fù)蘇：采用含 10% DMSO 的無血清培養(yǎng)基，細(xì)胞密度 1×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，直接接種于懸浮培養(yǎng)基，48 小時密度可恢復(fù)至 3×10?個 /mL（存活率＞85%）。
病毒培養(yǎng)與檢測操作
PRRSV 培養(yǎng)優(yōu)化：細(xì)胞密度達(dá) 3×10?個 /mL 時接種病毒（MOI=0.01），培養(yǎng)溫度降至 35℃可使病毒滴度提升 2 倍，72 小時收獲時活率仍保持 70% 以上；與 IPI-FX 的貼壁感染不同，懸浮培養(yǎng)可通過取樣直接檢測病毒滴度，無需消化細(xì)胞。
病毒滴度測定：采用終點(diǎn)稀釋法，在 96 孔板中培養(yǎng) ST-2014S 細(xì)胞，48 小時后觀察 CPE，Reed-Muench 法計(jì)算 TCID??，結(jié)果變異系數(shù)＜5%（IPI-FX 為 12%），適合疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
優(yōu)勢：
工業(yè)化生產(chǎn)能力卓yue：是唯yi能實(shí)現(xiàn) 500L 規(guī)模懸浮培養(yǎng)的豬源細(xì)胞系，病毒產(chǎn)量是 IPI-FX 的 30 倍，生產(chǎn)成本降低 60%，徹di解決了 PRRSV 疫苗規(guī)模化生產(chǎn)的瓶頸。
病毒敏感性與穩(wěn)定性高：對 PRRSV 的感染效率與滴度穩(wěn)定性居豬源細(xì)胞系首wei，連續(xù)傳代 100 次后滴度波動＜10%（IPI-FX 為 30%），為疫苗質(zhì)量均一性提供保障。
操作簡便性突出：懸浮培養(yǎng)無需yi酶消化與換液，可通過生物反應(yīng)器自動控制，勞動強(qiáng)度僅為 IPI-FX 貼壁培養(yǎng)的 1/10，適合自動化生產(chǎn)。
局限性：
組織特異性局限：不表達(dá)腸道屏障蛋白（如 ZO-1），無法模擬 IPI-FX 的腸道感染模型，需與腸道細(xì)胞系配合使用以覆蓋多器官研究。
病毒譜較窄：對腸道病毒、呼吸道病毒（如豬流感病毒）的支持能力弱，僅適用于特定病毒研究。
功能研究受限：缺乏 IPI-FX 的代謝與免疫功能，無法用于病毒與宿主互作的深度機(jī)制研究。
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