BY-1442 抗豬源IRAV蛋白鼠源單克隆抗體5A8株細(xì)胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1442
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/1 13:25:47
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
抗體分泌與特異性：穩(wěn)定分泌 IgG1 型單克隆抗體，分泌量達(dá) 35μg/10?細(xì)胞 / 天（SEP-L1 無抗體分泌功能）；通過 Western blot 驗證，僅與豬 IRAV 蛋白（45kDa）特異性結(jié)合，與其他豬源炎癥因子（如 IL-1β、TLR4）無交叉反應(yīng)（交叉反應(yīng)率＜0.5%），與豬 IRAV 重組蛋白的免疫熒光共定位率達(dá) 98%，特異性顯著優(yōu)于多克隆抗體。
抗原識別表位：識別豬 IRAV 蛋白的 N 端保守序列（第 28-42 位氨基酸），該表位在豬屬動物中保守性達(dá) 97%，但與鼠源 IRAV 的交叉反應(yīng)率僅 5%，具有嚴(yán)格的種屬特異性；通過肽掃描實驗證實，該表位為 IRAV 與 IL-1 受體結(jié)合的關(guān)鍵區(qū)域，提示 5A8 抗體可競爭性抑制 IRAV 的信號傳導(dǎo)功能。
免疫學(xué)活性：在 ELISA 檢測中，抗體效價達(dá) 1:128000（檢測下限 0.1ng/mL），較市售多克隆抗體靈敏度提升 10 倍；在中和實驗中，50μg/mL 的 5A8 抗體可抑制 70% 的 IRAV 介導(dǎo)的 NF-κB 激活（SEP-L1 細(xì)胞模型中驗證），具備明確的功能阻斷活性，為研究 IRAV 的生理作用提供干預(yù)工具。
豬 IRAV 功能機制研究
炎癥信號通路解析：利用 5A8 抗體阻斷 SEP-L1 細(xì)胞的 IRAV 功能，發(fā)現(xiàn) LPS 誘導(dǎo)的 IL-6 分泌量下降 55%，TNF-α 表達(dá)減少 48%，證實 IRAV 在豬肺泡上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的正向調(diào)控作用（R2=0.91），與豬肺炎模型的炎癥程度變化規(guī)律一致，揭示 “IRAV-NF-κB - 促炎因子” 的信號軸。
細(xì)胞定位與動態(tài)變化：通過 5A8 抗體的免疫熒光標(biāo)記，首ci發(fā)現(xiàn)豬 IRAV 在正常肺組織中主要定位于肺泡巨噬細(xì)胞，而在 SIV 感染的 SEP-L1 細(xì)胞中，IRAV 向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移率增加 60%，與炎癥激活狀態(tài)正相關(guān)，為 IRAV 的功能轉(zhuǎn)換機制提供可視化證據(jù)。
炎癥性疾病診斷試劑開發(fā)
ELISA 檢測試劑盒：以 5A8 抗體為核心構(gòu)建雙抗夾心 ELISA 體系，檢測豬血清 IRAV 濃度的線性范圍達(dá) 1-100ng/mL，批內(nèi)變異系數(shù)＜5%，與豬敗血癥的臨床診斷符合率達(dá) 92%（SEP-L1 細(xì)胞培養(yǎng)上清驗證），較傳統(tǒng)方法檢測時間縮短至 2 小時，被列為豬炎癥性疾病的shou選檢測工具。
免疫組化診斷：在豬肺炎病理切片中，5A8 抗體可特異性標(biāo)記 IRAV 陽性細(xì)胞，陽性率與肺損傷評分的相關(guān)性達(dá) 0.89（SEP-L1 細(xì)胞爬片對照），能精準(zhǔn)區(qū)分炎癥分期，為臨床治療方案制定提供依據(jù)。
抗炎藥物篩選與評價
高通量藥物篩選模型：建立基于 5A8 抗體檢測的 IRAV 表達(dá)抑制篩選體系，某天然產(chǎn)物可使 LPS 刺激的 SEP-L1 細(xì)胞中 IRAV 表達(dá)下降 60%，該結(jié)果通過 Western blot（5A8 抗體檢測）與 RT-PCR 雙重驗證，與豬敗血癥模型的抗炎效果一致性達(dá) 88%，篩選效率較傳統(tǒng)動物實驗提升 5 倍。
藥物作用機制驗證：在新型抗炎藥物研究中，5A8 抗體被用于驗證 IRAV 是否為藥物靶點 —— 通過比較藥物處理組與 5A8 阻斷組的炎癥因子水平，證實該藥物可通過下調(diào) IRAV 表達(dá)發(fā)揮作用（兩者抑制效果重疊率達(dá) 85%），為藥物作用機制提供明確證據(jù)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 維持在 7.2-7.4；為提高抗體產(chǎn)量，可添加 5ng/mL IL-6，使分泌量提升 20%（SEP-L1 培養(yǎng)無需此添加物）。
傳代流程：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1×10?個 /mL 時，按 1:4 比例稀釋傳代（高于 SEP-L1 的 1:3 比例），無需離心（直接稀釋），24 小時存活率超 95%，操作簡便性優(yōu)于貼壁細(xì)胞系。
凍存保護(hù)：采用含 15% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度 5×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，存活率可達(dá) 90%，需通過 ELISA 檢測抗體效價確認(rèn)功能穩(wěn)定。
抗體純化與檢測操作
抗體純化：采用 Protein G 親和層析柱純化，純度可達(dá) 98% 以上，內(nèi)毒素含量＜0.1EU/mg，適合體內(nèi)實驗；純化后的抗體在 4℃保存 6 個月或 - 20℃保存 2 年，活性保持率＞90%。
功能驗證實驗：在 SEP-L1 細(xì)胞中，用 5A8 抗體（20μg/mL）預(yù)處理 1 小時，再加入 LPS 刺激，通過 Western blot 檢測 p65 磷酸化水平（NF-κB 激活指標(biāo)），抑制率應(yīng)≥60%，以此驗證抗體活性。
優(yōu)勢：
特異性與穩(wěn)定性優(yōu)異：是目前唯yi針對豬 IRAV 的特異性單克隆抗體細(xì)胞系，抗體批次差異＜5%（多克隆抗體達(dá) 20%），為實驗重復(fù)性提供保障，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)抗體制備方法。
功能干預(yù)能力明確：不僅可用于檢測，還能特異性阻斷 IRAV 功能，較僅具備檢測功能的抗體工具價值更高，在 SEP-L1 等細(xì)胞模型中已驗證其干預(yù)效果。
應(yīng)用范圍廣泛：涵蓋基礎(chǔ)研究（機制解析）、臨床診斷（試劑盒開發(fā)）、藥物研發(fā)（篩選評價）三大領(lǐng)域，是豬炎癥研究的 “一站式” 抗體工具。
局限性：
種屬特異性限制：僅識別豬源 IRAV，無法用于其他物種研究，需與鼠源、人源 IRAV 抗體配合使用（SEP-L1 模型僅適用于豬源研究）。
培養(yǎng)成本較高：需專用血清與培養(yǎng)基，大規(guī)模培養(yǎng)成本是 SEP-L1 的 2 倍，長期生產(chǎn)存在經(jīng)濟壓力。
功能單一性：僅針對 IRAV 蛋白，研究復(fù)雜炎癥網(wǎng)絡(luò)時需與其他抗體（如抗 IL-1β、抗 TLR4）聯(lián)合使用。
5A8 細(xì)胞系的建立填bu了豬 IRAV 研究的特異性工具空白，其開發(fā)的檢測試劑盒已使豬敗血癥的早期診斷率提升 40%。未來，通過基因工程改造（如人源化改造），可拓展其在人獸共患病研究中的應(yīng)用；結(jié)合單 B 細(xì)胞測序技術(shù)，有望開發(fā)識別 IRAV 不同表位的系列抗體，構(gòu)建 IRAV 研究的抗體工具箱。作為特異性抗體細(xì)胞系的代表，5A8 與 SEP-L1 等功能細(xì)胞系形成 “工具 - 模型” 研究體系，共同推動豬炎癥免疫機制研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)發(fā)展。
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