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BY-1272 RNBEC/HL-033大鼠正常膀胱上皮細胞系

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RNBEC/HL-033大鼠正常膀胱上皮細胞系
RNBEC/HL-033大鼠正常膀胱上皮細胞系作為源自大鼠膀胱黏膜的上皮細胞模型,因保留膀胱上皮te有的屏障功能與分泌特性,在膀胱生理功能調控、尿路疾病機制及損傷修復研究中具有重要價值,成為探究膀胱上皮細胞生物學特性及相關疾病的關鍵實驗工具。
細胞特性與來源背景:該細胞系源自大鼠膀胱黏膜的移行上皮組織,經原代培養(yǎng)和純化獲得。細胞形態(tài)呈典型上皮樣,多為多邊形或立方形,胞體大小均勻(直徑約 18-22μm),胞質豐富且呈嗜酸性,可見大量橋粒結構和中間絲,約 15% 細胞呈現雙核特征,細胞核呈圓形或橢圓形,位于細胞中央,核仁清晰。生長方式為貼壁生長,呈單層 “鋪路石” 樣排列,具有明顯的接觸抑制現象,傳代后 24 小時貼壁率達 94%。核心參數符合正常膀胱上皮細胞特征:倍增時間約 65 小時,連續(xù)傳代 20 次后仍保持穩(wěn)定的生物學特性;表面標志物表達du特,細胞角蛋白 13(CK13)陽性率達 95%,膀胱上皮特異性標志物 uroplakin III 陽性率 93%,緊密連接蛋白 occludin 陽性率 91%;具有正常的二倍體核型(染色體數 42 條),無染色體畸變;屏障功能顯著,跨上皮電阻(TEER)值達 450Ω?cm2,對尿素的通透性僅為 0.25μL/(h?cm2);分泌功能活躍,黏蛋白(MUC5AC)基礎分泌量達 32ng/mL,防御素 β2 分泌量達 18pg/mL;無微生物污染,細胞純度達 97%,保障實驗結果的可靠性。
科研應用價值:在膀胱屏障功能研究中,RNBEC/HL-033 細胞經脂多糖(LPS)處理 48 小時后,緊密連接蛋白 claudin-4 表達量下降 55%,跨上皮電阻值降低 60%,細菌黏附率增加 4.2 倍,可模擬膀胱炎狀態(tài)下膀胱上皮屏障的破壞過程,為解析膀胱黏膜防御機制提供理想模型。
膀胱損傷修復研究方面,該細胞經硝suan銀(膀胱損傷誘導劑)處理后,乳酸脫氫酶(LDH)釋放量增加 4.8 倍,損傷區(qū)域面積占比達 38%,增殖相關基因 Ki67 表達量提升 50%;而經表皮生長因子(EGF)處理后,細胞遷移速率增加 60%,損傷修復率提升 45%,可模擬化學性膀胱損傷及修復過程,適用于探究膀胱上皮再生機制。
尿路疾病研究領域,該細胞經高濃度尿液溶質(尿酸鹽結晶 500μmol/L)處理后,炎癥因子 IL-8 分泌量增加 5.2 倍,活性氧(ROS)水平提升 65%,細胞凋亡率達 35%,能很好地模擬膀胱結石引起的上皮損傷,為探究尿路結石相關膀胱炎的發(fā)病機制提供實驗基礎。此外,該細胞與膀胱平滑肌細胞共培養(yǎng)時,平滑肌細胞的收縮相關蛋白 MLCK 表達量增加 3 倍,可用于探究上皮 - 平滑肌相互作用在膀胱功能調控中的機制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范:推薦使用含 15% 胎牛血清的 Keratinocyte-SFM 培養(yǎng)基,添加 0.1ng/mL 表皮生長因子(EGF)、0.5μg/mL 氫化ke的松及 1% 抗生素混合液,培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2 天更換一次,以維持細胞的屏障功能和分泌活性。傳代時,用 PBS 沖洗細胞 2 次,加入專用上皮細胞解離液,37℃孵育 8-10 分鐘,待細胞邊緣收縮后輕輕吹打使細胞脫落,傳代比例為 1:2-1:3,每 5-6 天傳代一次,避免過度傳代導致分化標志物表達下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液,細胞濃度調整為 3×10?個 /ml,經程序降溫(-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮保存)后,復蘇存活率達 85% 以上,3-4 代內可恢復正常的生長和屏障功能。運輸采用干冰冷凍運輸或培養(yǎng)瓶活細胞運輸,收到細胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時,更換培養(yǎng)基后觀察細胞形態(tài),確認無異常漂浮物且排列緊密后進行實驗。該細胞系僅限科研使用,操作時需避免頻繁更換培養(yǎng)溫度,以防影響緊密連接的穩(wěn)定性。
RNBEC/HL-033 大鼠正常膀胱上皮細胞系以其穩(wěn)定的膀胱上皮特性、完整的屏障功能及典型的損傷應答能力,在膀胱生物學研究與尿路疾病機制探索中發(fā)揮著重要作用,為揭示膀胱疾病的發(fā)病機制和開發(fā)膀胱保護藥物提供了可靠的細胞模型。

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