羥脯氨酸檢測試劑盒（微量法）說明書

產(chǎn)品名稱:羥脯氨酸檢測試劑盒（微量法）

貨號:SH151W

規(guī)格: 100T/96S

產(chǎn)品簡介：

HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標(biāo)。

樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一補(bǔ)被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基benjiaquan反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。

產(chǎn)品內(nèi)容：

組織提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃鹽酸：H2O（V/V）= 1:1，室溫保存；

細(xì)胞提取液：液體100mL×1 瓶，4 ℃保存；

試劑一：液體10mL×1 瓶，4 ℃避光保存；

試劑二：液體10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。

操作步驟：      

一、羥脯氨酸提?。?/span>

1. 組織：取約0.2g 樣品于玻璃管，加入2mL的組提取液，置于110℃烘箱，水解6至12小時，16000rpm，25℃，離心20min，用提取液定容至2mL，取上清待測。

2.  細(xì)胞：取約500 萬個細(xì)胞，加入1mL 的細(xì)胞提取液，于高壓消毒器中15 磅保持30min，自然降壓后待測。

二、測定操作：

羥脯氨酸含量計算：

用微量比色皿測定的計算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=64.875x+ 0.0251，R²=0.9991  

（1）按組織計算

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)  

                        =0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按細(xì)胞計算：

HYP含量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）

=0.077×（A₅₆₀-0.0251）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL； V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，mL； W：樣本質(zhì)量，g。

用96孔板測定的計算公式如下:

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=32.4375x+ 0.0251，R²=0.9991  

（1）按組織計算

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)  

                        =0.308×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按細(xì)胞計算：

HYP含量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）

=0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL； V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，mL； W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項：

1、OD值大于0.8，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、試劑有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施，防止吸入或與皮膚接觸。