脫氫抗壞血酸（DHA ）含量檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱:脫氫抗壞血酸（DHA ）含量檢測試劑盒

紫外分光光度法

貨號：SH325Z

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 60 mL×1 瓶，室溫保存。

試劑一：液體 40 mL×1 瓶，室溫保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加入 5mL 蒸餾水充分溶解。溶解后可分裝保存于-20℃。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加入 5.743 mL 蒸餾水充分溶解；吸取 0.1 mL 上述溶液，加入 0.9 mL 蒸餾水，混勻，即為 0.1μmol/mL DHA。溶解后可分裝保存于-20℃。

產(chǎn)品介紹：

AsA 作為植物細(xì)胞一個重要生理指標(biāo)，其 AsA 的含量、氧化還原狀態(tài)(AsA/DHA 比率)及其合成與代謝相關(guān)酶類活性的變化涉及植物對一系列環(huán)境脅迫的響應(yīng)。DHA 是 AsA 的可逆的氧化型，在生物體內(nèi)，與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng)，具有電子受體的作用。

DTT 還原 DHA 生成 AsA，通過測定體系中 AsA 的生成速率，即可計算出 DHA 含量。

自備儀器和用品：

低溫離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、 樣品中 DHA  提?。?/span>

稱取約 0.1g 樣品，加提取液 1 mL，冰上充分研磨，16000g 4℃離心 20min，取上清液待測。

二、DHA  測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 265 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min 以上。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在 1mL 石英比色皿加入 100μL 標(biāo)準(zhǔn)液、800μL 預(yù)熱的試劑一和 100μL 試劑二，迅速混勻后于 265nm 比色，記錄 10s 和 130s 的吸光值。

4. 測定管：依次在 1mL 石英比色皿加入 100μL 上清液、800μL 預(yù)熱的試劑一和 100μL 試劑二，迅速混勻后于 265nm 比色，記錄 10s 和 130s 的吸光值。

三、 樣品中 DHA  含量計算：

（1） 按蛋白濃度計算

DHA(μmol/mg prot) =C 標(biāo)準(zhǔn)液×(△A 測定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管)÷Cpr=0.1×△A 測定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

DHA(μmol/g) = [C 標(biāo)準(zhǔn)液×△A 測定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 樣總]÷W=0.1 ×△A 測定管÷△A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：DHA 濃度，0.1μmol/mL；V 樣總：上清液總體積，1.0 mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項：

正式實驗前做 1~2 個預(yù)實驗，保證?A 的取值不高于 0.4。