IMDM 培養(yǎng)基

Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)，Guilber 和Iscove將Dulbecco’Medium 改良為 Iscove’s Medium，用于培養(yǎng)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。此種培養(yǎng)液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進(jìn)小鼠B淋巴細(xì)胞，LPS刺激的B細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞，T細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞的生長。IMDM為營養(yǎng)非常豐富的培養(yǎng)液，因此可以用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。

1）復(fù)蘇IMDM：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查IMDM密度。

2）細(xì)胞傳代：如果IMDM密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗IMDM 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若IMDM大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待IMDM生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

1.使用IMDM時(shí)應(yīng)注意無菌操作，避免污染。

2.本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

3.為保持本IMDM的優(yōu)良使用效果，不宜將其長時(shí)間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

4.所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。

5.本產(chǎn)品只供進(jìn)一步科研使用，不可應(yīng)用于臨床等其他方面。

6.培養(yǎng)基凍融后，可能會有少量絮狀物析出，不影響IMDM正常使用。