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COMP 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA 試劑盒

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軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA 試劑盒

酶與抗體交聯(lián),常用戊二醛法和過(guò)碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標(biāo)記抗體的改良過(guò)碘酸鈉法簡(jiǎn)單易行,標(biāo)記效果好,特別適用于實(shí)驗(yàn)室的小批量制備。其標(biāo)記程序?yàn)椋簩?μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中,加入新鮮配制的0.06 mol/L的過(guò)碘酸鈉(NaIO4)水溶液0.5ml,混勻置4℃冰箱30分鐘 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室溫放置30分鐘后加入含5(g純化抗體的水溶液1ml,混勻并裝透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時(shí)(或過(guò)夜)使之結(jié)合,然后吸出,加硼氫化鈉(NaBH4)溶液( 5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小時(shí),將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和硫酸銨溶液,置4℃冰箱30分鐘后離心,將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中,并對(duì)之透析過(guò)夜(4℃),次日離心除去不溶物,即得到酶標(biāo)抗體,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,進(jìn)行測(cè)定后,冷凍干燥或低溫保存。

軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA 試劑盒

競(jìng)爭(zhēng)法

  1. 競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,其操作步驟為:

  2. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

  3. 加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3.   精密移液器及一次性吸頭

4.   蒸餾水,

5.   一次性試管

6.   吸水紙

 



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