大鼠γ干擾素(IFN-γ)定量檢測elisa試劑盒
- 公司名稱 黃石研科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 湖北黃石
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2018/10/17 9:40:03
- 訪問次數(shù) 325
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【檢驗方法】
試劑準(zhǔn)備
檢測前請將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫。 如果濃縮的試劑出現(xiàn)結(jié)晶,37℃溫浴,直至結(jié)晶全部溶解。
1×洗液
吸取 20×濃縮洗液 30 ml 至 1 L 的量筒,加蒸餾水或去離子水至600 ml,輕輕混勻,避免泡 沫。 轉(zhuǎn)移至干凈瓶內(nèi)。2 - 25℃貯存,1×洗液可穩(wěn)定 30 天。
1×檢測緩沖液
吸取 10×濃縮檢測緩沖液 5 ml 至 100 ml 量筒,加蒸餾水或去離子水至 50 ml,輕輕混勻,避 免泡沫。 2 - 8℃貯存,1×檢測緩沖液可穩(wěn)定保存 30 天。
檢測抗體
稀釋前充分混勻。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量,用 1×檢測緩沖液按 1:100 稀釋濃縮的檢 測抗體。 注意:請在 30 分鐘內(nèi)使用稀釋后的檢測抗體。
辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素
稀釋前充分混勻。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本的數(shù)量,用 1×檢測緩沖液按 1:100 稀釋濃縮的辣根過氧化物酶標(biāo)記的 鏈霉親和素。 注意:請在 30 分鐘內(nèi)使用稀釋后的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
樣本稀釋
如果樣本需要稀釋,請用試劑盒提供的 1×檢測緩沖液稀釋血清/血漿樣本,用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋 細(xì)胞培養(yǎng)上清。
大鼠IFN-γ 標(biāo)準(zhǔn)品
用蒸餾水或去離子水重溶大鼠IFN-γ標(biāo)準(zhǔn)品,重溶體積標(biāo)注在大鼠IFN-γ標(biāo)準(zhǔn)品。輕柔 地渦旋震蕩,確保充分混勻,重溶后標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為8000 pg/ml。重溶后靜置 10 - 30 分鐘。稀釋 前充分混勻。 請使用聚丙烯管進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
血清/血漿樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:
取 150 μl 濃縮的大鼠IFN-γ標(biāo)準(zhǔn)品,加入 150 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度 (4000pg/ml)。在每一個試管中加入 150 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做 1:1 系列稀釋。每次移 液時,請確保充分混勻。以標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。
(標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次是:4000,2000,1000,500,250,125,62.5, 0pg/mL)
細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:
取 150 μl 濃縮的大鼠IFN-γ標(biāo)準(zhǔn)品,加入 150 μl 細(xì)胞培養(yǎng)基,作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度 (4000pg/ml)。在每一個試管中加入 150 μl 細(xì)胞培養(yǎng)基。使用高濃度標(biāo)準(zhǔn)品做 1:1 系列稀釋。每次移液 時,確保充分混勻。以細(xì)胞培養(yǎng)基作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零濃度。
(標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次是:4000,2000,1000,500,250,125,62.5, 0pg/mL)
【檢測步驟】
檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫。
1. 準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 將不需要的板條拆卸下來,放回裝有干燥劑的鋁箔袋,重新封好封口。
3. 加入 300 μl 1×洗液靜置浸泡 30 秒。為了獲得理想的實驗結(jié)果浸泡是必須的。棄掉洗液之后, 在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后,請立即使用微孔板,不要讓微孔板干燥。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 50 μl 1x檢測緩沖液和50ul2倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品??瞻卓准尤?50ul 1x 檢測緩沖液和50ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。
5. 樣本孔加入 80μl 1×檢測緩沖液和 20 μl 樣本。
6. 每孔加入 50 μl 稀釋的檢測抗體。保證步驟 4、5、6 連續(xù)加樣,不要間斷。加樣過程在 15 分 鐘內(nèi)完成。
7. 使用封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫孵育 1.5小時。
8. 棄掉液體,每孔加入 300 μl 洗液洗板,洗滌 6 次。每次洗板,在吸水紙上拍干。為獲得理想的 實驗性能,必須*移除殘留液體。
9. 每孔加入 100 μl 稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。
10. 使用新的封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫孵育30分鐘。
11. 重復(fù)步驟 8。
12. 每孔加入 100 μl 顯色底物 TMB,避光,室溫孵育 5 - 30 分鐘。
13. 每孔加入 100 μl 終止液。顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均 勻,請輕輕叩擊板框,充分混勻。
14. 在 30 分鐘之內(nèi),使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長檢測,測定 450 nm 最大吸收波長和 570 nm 或 630 nm 參考波長下的 OD 值。校準(zhǔn)后的 OD 值為 450 nm 的測定值減去 570 nm 或 630 nm 的測定值。 僅使用 450 nm 測定會導(dǎo)致 OD 值偏高,并且準(zhǔn)確度降低。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用,過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值,請將樣本適當(dāng)稀釋后,再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果,檢測前,請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果,與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。