結晶紫酶聯(lián)免疫反應測試盒

結晶紫ELISA試劑盒特點 ：

高回收率（80-95%)，快速地從魚蝦或者水樣中提取結晶紫試劑盒也可以檢測隱性結晶紫，檢測前先用提供的氧化液將隱性結晶紫轉變成有色結晶紫。96孔高通量定量檢測，魚或者蝦樣品的檢測下限為)0. 1PPB制備好的樣品，可以直接用于LC或者LC/MS確認，高重復性結晶紫酶聯(lián)免疫反應檢測試劑盒是利用競爭性的酶聯(lián)反應原理定量檢測分析結晶紫在魚、蝦以及魚池或者魚缸水樣中的含量。

結晶紫ELISA試劑盒原理：

實驗方法基于競爭性酶聯(lián)反應原理。徹孔板上包被有 cv的特異性抗體。測試分析時.樣品和 CV- HRP耦合物共同孵育。如果樣品中含有CV抗原，就會競爭抗體，從而陌止CV-HRP耦合物與抗體結合。加入HRF耦合物的底物在加入底物后將催化底物 顯 色 . 根 據(jù) 顏 色 反 應 的 靈 敏 度 來 確 定 樣 品 中C V的 濃 度 。 顏 色的深淺同樣品中藥物的濃度成反比矢系。

注意事項：

i>標準品中含有結晶紫，請小心使用。

2>不要使用過期的試劑盒。

3)不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。確保二抗及二抗稀釋液正確配制。

4>盡 M保持室溫20-25 V,避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)a在 孵 W 期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5>水質量很里要，確保使 m蒸餾或者去離子水。

6>加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7>孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8>從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質的風險。

9>將微孔板置于放有千燥劑的密封袋中，冷藏保存。

試劑盒組成：

已包被抗體的酶標板 （CRYSTAL VIOLET AB-COATED

PLATE)( 可拆式）

12x8 孑 L

標準液（ STANDARDS) (0 , 0.OS , 0.15 , O.S , 1.S , 4.S

NG/M L ) 6 x 1 .8 M L

回收用 100PPB (SPI Kl NG)( 可選）

1 x 〇 . 8 M L

CV-HRP 耦合物（ CV-HRP CONJUGATE)

1 x 8 M L

2 〇 x 濃縮洗液 （WASH SOLUTION)

1 x 28 M L

終止液 （STOP BUFFER)

1 x 20 M L

TMB 底 物 （TMB SUBSTRATE)

1 x 1 2 M L

提取物 A(CONCENTRATE OF SAMPLE EXTRACTION

BUFFER A)( 包括試劑 I 和 M) 20G

1 〇 x 提取液 B (SAMPLE EXTRACTION B)

檢測步驟

(1 )加入1 00 L的標準品或樣品于所設定的孔中；

(2 )在每孔中加入50 L CV- HRP耦合物，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

(3 )避光室溫（20 - 25 °C )溫育1小時；

(4 )洗板3次，每次加入250 L 1 x洗液，后_次盡量甩干并在吸水紙上吸干；

(5 )加入100 L的 TMB底物；

(6 )在室溫下避光培養(yǎng)20分鐘，加入100 L的終止液終止反應，在450 NM下讀0 D值（底物本身是無色的，顏色發(fā)生變化不能使用。孵育時適當覆蓋微孔板）。

試劑的準備

確定樣品正確儲存.通常，樣品應該在2-4° C下冷藏不得超過1 - 2天.如果需要長時間保存冷凍樣品低溫度-20 X.凍結的樣品在室溫（20-2 SaC / 68-77 ttF)下解凍或者在使用之前放在冰箱中保存。所有的試劑在使用之前應將其回溫至室溫，并在使用試劑前搖動幾下，以保證合理的濃度^

(1 ) 1倍氧化劑液

根據(jù)實際上需要，按9: 1用乙腈稀釋10 x氧化劑液（1〇 X OXIDANT SOLUTION)。

(2 ) 1倍提取液A

打幵提取液A固體濃縮袋（EXTRACTION BUFFER A CONCENTRATE ),取出試劑 I和丨丨，混和加入一容 fi瓶中•加入100 ML雙蒸水，攪拌至*溶解，可在室溫(2 0-2 S °C / 68-7 7*^)下*保存。（試劑具有腐蝕性，混合攪拌時候帶手套操作）

(3 ) 1倍提取液B

根據(jù)實際上需要，按9:1用蒸餾水稀釋1〇 X 提取液B。

(4 ) 1倍提取液C液

根據(jù)實際上需要，按9:1用蒸餾水稀釋1〇 X 提取液C

(1) 分別計箅標準和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值相對吸光度值（％) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值）*100

(2) 以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線

(3) 從標準曲線上讀取樣品的濃度值備注：如結果呈陽性反應，應該用其他檢驗方法（如色譜/質譜方法等）進行確證。