人前列腺特異性抗原（PSA）elisa試劑盒

 用純化的人前列腺特異性抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入前列腺特異性抗原(PSA),再與HRP 標記的前列腺特異性抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色.TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色.顏色的深淺和樣品中的前列腺特異性抗原(PSA)呈正相關(guān).用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人前列腺特異性抗原(PSA)濃度.試劑盒組成1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(1600pg/ml) 0.5ml×1 瓶3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份5 顯色劑A液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性.

 操作步驟1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋.800pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液400pg/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液200pg/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液100pg/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液50pg/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同),標準孔,待測樣品孔.在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5 倍).加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘.4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干.6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.7. 溫育:操作同3.8. 洗滌:操作同5.9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色).11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值). 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行.操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度.注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果.3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差.一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔.如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標準品孔孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5).5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.6.底物請避光保存.7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.9.本試劑不同批號組分不得混用.10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準.保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃.2.有效期:6 個月

人前列腺特異性抗原（PSA）elisa試劑盒