大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白
- 公司名稱 上海奧陸生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2021/6/29 12:01:10
- 訪問次數(shù) 686
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 科研 |
檢測范圍： 96T
150pg/ml-4000pg/ml
使用目的：
大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白試劑盒 用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）含量。
實驗原理
大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白試劑盒純化的大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL），再與HRP標記的中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（8000pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
- 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
4000pg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2000pg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
1000pg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
500pg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
250pg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
- 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
- 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
- 溫育：操作同3。
- 洗滌：操作同5。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
- 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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