實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠糖化血紅蛋
白（GHb）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育
并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠糖化血紅蛋白（GHb）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm
波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
樣本處理及要求
全血：用含有抗凝劑的無菌管收集，立即輕輕搖動(dòng)，來回輕輕顛倒數(shù)次，使血液和抗凝劑混
勻，以防血液凝固。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
需要而未提供的試劑和器材
1.
酶標(biāo)儀（450nm）
2.
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱
96 孔配置
48 孔配置
備注
8
微孔酶標(biāo)板
12 孔×8 條
12 孔×4 條
無
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL*6 管
0.3mL*6 管
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進(jìn)行稀釋
底物 A
6mL
3mL
無
底物 B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2 張
2 張
無
說明書
1 份
1 份
無
自封袋
1 個(gè)
1 個(gè)
無
備注：
1.
標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：400、200、100、50、25、12.5 ng/mL
2.
經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中
直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本
進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1.
嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室
溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2.
洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中
不要讓微孔干燥掉。
3.
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
4.
底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5.
避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6.
在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7.
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8.
任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞
試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9.
不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1.
從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
9
2.
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；
3.
樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。
4.
除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體
100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5.
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.
每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪
制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1.
檢測范圍：12.5 ng/mL – 400 ng/mL。
2.
靈敏度：檢測濃度小于 1.0 ng/mL。
3.
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。
說明

小鼠糖化血紅蛋白（GHb）試劑盒（ELISA）

由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分
析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
1.
最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)
務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
2.
不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù)
試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
3.
只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有
嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到的檢測結(jié)果。
4.
本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使
用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
5.
使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致
10
ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
6.
若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)
間等，所以可能存在檢測不出的情況。
7.
某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測
抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。