奧秘佳得專注于生產(chǎn)外泌體相關(guān)試劑

高純度外泌體提取步驟：

1. 本產(chǎn)品可用于血清等粘度較大液體中外泌體的純化，也可用于細(xì)胞培養(yǎng)上清等粘度較小液體中外泌體的分離純化。

2. 樣品準(zhǔn)備。 血清或細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入離心管， 5,000 rpm， 4 ℃離心 5 min， 棄沉淀， 上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，用于外泌體純化。 樣品也可用 0.2 μm 的濾膜過濾， 除去雜質(zhì)。

3. 磁珠準(zhǔn)備。取出試劑盒中的瓶裝磁珠，震蕩混勻（Vortex） 30 sec， 利用移液器吸取 0.2 ml 磁珠，加入 50 ml 離心管中， 5,000 rpm， 4 ℃離心 2 min，棄上清。

4. 磁珠洗滌。 加入 10 ml 4 ℃預(yù)冷的 PBS（0.2 μm 濾膜過濾） ，震蕩混勻（Vortex） 30 sec， 5,000rpm， 4 ℃離心 5 min，棄上清。

5. 外泌體純化體系。 

6. 配制外泌體純化體系。 根據(jù)外泌體純化體系表，配制外泌體純化體系， 若樣品體積不足 15.6 ml時(shí)， 可以用無菌的 ddH2O（0.2 μm 濾器過濾） 補(bǔ)齊體積。也可以按照比例減少試劑盒中各試劑的用量（請(qǐng)勿隨意更改各試劑比例， 易導(dǎo)致外泌體純化失?。?，構(gòu)建小體系外泌體純化系統(tǒng)，但每個(gè)樣品中磁珠用量不得少于 0.2 ml，否則降低外泌體純化效果。

7. 孵育。 外泌體純化體系配制完成后， 置于旋轉(zhuǎn)混合器中， 4 ℃旋轉(zhuǎn)混合 60 min。

8. 磁珠收集。 孵育完畢將離心管轉(zhuǎn)入離心機(jī)， 5,000 rpm， 4 ℃離心 5 min，沉淀磁珠， 棄上清；或?qū)㈦x心管置于磁力架上， 4 ℃靜置 5-10 min， 使磁珠聚集， 棄上清。

9. 殘余液體去除。將裝有磁珠沉淀的離心管轉(zhuǎn)入離心機(jī)， 5,000 rpm， 4 ℃離心 1 min， 用移液器吸盡管中殘余液體。

10. 外泌體洗脫。加入 0.2-0.5 ml Buffer EXE（或 PBS 與 ddH2O）， 劇烈振蕩（Vortex） 30 sec。

11. 外泌體收集。 8,000 rpm， 4 ℃離心 2 min， 立即將上清轉(zhuǎn)移至 EP 管中，即為純化的外泌體溶液。

12. 過濾。 利用 PBS（0.2 μm 濾膜過濾）潤洗針式過濾器 A 和 B（即用這兩種濾器過濾 5 ml PBS） ，并利用針式過濾器 A 過濾外泌體溶液，除去體積較大雜質(zhì)。 濾液再用針式過濾器 B 過濾，除去體積較小的雜質(zhì)，得到除去雜質(zhì)的外泌體溶液。

13. 純化的外泌體溶液可立即用于粒徑檢測(cè)（NTA 分析），或保存在-80 ℃。

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