丙酮酸磷酸雙激酶（PPDK）測試盒

分光光度法 50 管/48 樣 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定 

測定意義： 

丙酮酸磷酸雙激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是 C4 途徑和景天科酸代謝途徑的限速酶，催化 ATP、丙酮酸和 Pi 經(jīng)三步反應(yīng)生成磷酸烯醇式丙酮酸。該酶主要存在于 C4 植物的葉綠體基質(zhì)中，對光合功能具有重要調(diào)節(jié)作用。 

測定原理： 

PPDK 的逆向反應(yīng)催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP 和 PPi 生成丙酮酸、ATP 和 Pi，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+，在 340nm 測定 NADH 減少速率，計(jì)算PPDK 活性。 

需自備的儀器和用品： 

紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 

試劑的組成和配制： 

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑一：液體 60 mL×1 瓶， 4℃保存； 

試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存； 

試劑三 ：液體 60μL×1 支，4℃保存；體積較少，若沾在管壁上，臨用前可低速離心后使用。樣本的前處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 

測定步驟和加樣表：1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。丙酮酸磷酸雙激酶（PPDK）測試盒