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分子克隆與質粒載體構建

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伊萊博生物科技(上海)有限公司,公司總部位于上海長江軟件園。2024年1月與上海大學醫(yī)學院成立聯(lián)合研究中心,主要以生命科學研究為基礎,專注于研究成果轉化及技術服務創(chuàng)新,建立了包含腫瘤生物學、病理學、免疫學、細胞生物學、生物化學與分子生物學以及動物實驗等學科的研究服務體系,為醫(yī)學領域的發(fā)展做出了重要貢獻。


目前已建成并投入使用的實驗室面積近2800平方米,包含基礎實驗平臺、組學實驗平臺以及動物實驗平臺,基本能夠滿足科研課題研究的全流程。


伊萊博生物擁有專業(yè)的技術支持和實驗操作人員團隊,核心成員來自中科院、復旦、交大、同濟等國內重點高校及科研機構,能夠提供前沿的、完善的實驗技術咨詢與服務。


為了響應國家大力發(fā)展基礎研究的號召,推動實驗科學領域的進步,伊萊博生物充分利用積累多年的科研資源優(yōu)勢,為廣大科研工作者提供實驗技術培訓服務,從理論和實操兩個部分,培養(yǎng)其科研思維以及解決問題的能力,為今后的科研工作奠定堅實的基礎。








免疫學;ELISA試劑盒,抗體,生化試劑,相關試劑。原代細胞,傳代細胞,及培養(yǎng)試劑

一、實驗原理

外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組,這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中,將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種:T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能,而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒有的特性,即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低,一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。

T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應分為3步:T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復合物;然后,酶—AMP復合物再結合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上,使DNA腺苷化;后產生一個新的磷酸二酯鍵,把切口封起來。

DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法,為了防止載體本身的自連,可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。

連接反應的溫度在37℃時有利于連接酶的活性.但是在這個溫度下,粘性末端的氫鍵結合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個折中溫度,即12-16℃,連接12-16h(過夜),這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性,又兼顧到短暫配對結構的穩(wěn)定。

二、實驗流程

目的DNA的擴增和純化;

連接反應;

電泳檢測連接產物。

三、客戶提供

樣本DNA,基因序列,試劑盒。

四、公司提供

構建好的載體,電泳膠圖,測序結果。

實驗周期:大約1-2月。





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