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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>BE6004 NAD-蘋果酸脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列

BE6004 NAD-蘋果酸脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
  • 品牌 NobleRyder/諾博萊德
  • 型號(hào) BE6004
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間 2025/7/17 10:31:14
  • 訪問次數(shù) 148

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北京諾博萊德科技有限公司始創(chuàng)于2012年,總部位于北京海淀區(qū),專注于科研生物領(lǐng)域,是一家研發(fā)、銷售和服務(wù)于一體的企業(yè)。公司秉承“誠(chéng)信為本,博采眾長(zhǎng)”的發(fā)展理念,致力于為科研工作者提供高質(zhì)量的生物產(chǎn)品和服務(wù)。

諾博萊德的產(chǎn)品覆蓋面廣泛,包括以下

生化試劑:抗生素、蛋白質(zhì)、染色劑、培養(yǎng)基、緩沖試劑、對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)品、磁珠;

即用型試劑:常規(guī)試劑溶液、即用型染色液、免疫學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞分離液人或其他動(dòng)物細(xì)胞;

通用耗材:移液管/架、吸頭、槍頭、移液器、離心管/盒/架、PCR耗材、濾紙、口罩手套、冷/凍存管/盒、培養(yǎng)板/皿/瓶、蓋/載玻片、刀片、包埋盒/框、封片劑、石蠟、鏡油等產(chǎn)品被國(guó)內(nèi)科研工作者廣泛應(yīng)用。

 

生化試劑,即用型試劑,分子生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué)

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
貨號(hào) BE6004 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)試劑盒



NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH試劑盒說明書

微量法 100 /96 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH 和NADP-依賴的MDH,細(xì)菌中通常只含有 NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

測(cè)定原理:

NAD-MDH 催化NADH 還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。


NAD-蘋果酸脫氫酶試劑盒   輔酶Ⅰ系列

組成:

產(chǎn)品名稱

BE6004-100T/96S

Storage

試劑一:提取液

100ml

4℃

試劑二:液體

20 ml

4℃

試劑三:粉劑

1

-20℃

說明書

一份

自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(ml) 1000~2000:1 的比例(建議 2000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml) 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、檢測(cè)工作液的配制:用時(shí)在試劑三中加入 19ml 試劑二和 0.5ml 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

3、測(cè)定前將檢測(cè)工作液在 37℃(哺乳動(dòng)物) 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μl 樣本和 195μl 工作液,混勻后立即記錄 340nm  20s 時(shí)的吸光A1 1min20s 后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意:A1-A2 大于 0.5,需將樣本用提取液稀釋,使 A1-A2 小于 0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH 活力單位的計(jì)算

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)NAD-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/ml)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=6430×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V 樣÷V 樣總)÷T=3.215×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; V 樣:加入樣本體積,0.005 ml;V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量, g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000 萬(wàn)。

b.  96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清(漿)NAD-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/ml)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=12860×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NAD-MDH 活力的計(jì)算:

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g 組織中每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =12860×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V 樣÷V 樣總)÷T=6.43×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm; V 樣:加入樣本體積,0.005 ml;V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量, g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000 萬(wàn)。


NAD-蘋果酸脫氫酶試劑盒   輔酶Ⅰ系列




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