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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>BV6008 谷胱gan肽還原酶(GR)活性測(cè)定試劑盒

BV6008 谷胱gan肽還原酶(GR)活性測(cè)定試劑盒

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
  • 品牌 NobleRyder/諾博萊德
  • 型號(hào) BV6008
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間 2025/7/18 8:53:14
  • 訪問(wèn)次數(shù) 108

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北京諾博萊德科技有限公司始創(chuàng)于2012年,總部位于北京海淀區(qū),專注于科研生物領(lǐng)域,是一家研發(fā)、銷售和服務(wù)于一體的企業(yè)。公司秉承“誠(chéng)信為本,博采眾長(zhǎng)”的發(fā)展理念,致力于為科研工作者提供高質(zhì)量的生物產(chǎn)品和服務(wù)。

諾博萊德的產(chǎn)品覆蓋面廣泛,包括以下

生化試劑:抗生素、蛋白質(zhì)、染色劑、培養(yǎng)基、緩沖試劑、對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)品、磁珠;

即用型試劑:常規(guī)試劑溶液、即用型染色液、免疫學(xué)試劑、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞分離液人或其他動(dòng)物細(xì)胞;

通用耗材:移液管/架、吸頭、槍頭、移液器、離心管/盒/架、PCR耗材、濾紙、口罩手套、冷/凍存管/盒、培養(yǎng)板/皿/瓶、蓋/載玻片、刀片、包埋盒/框、封片劑、石蠟、鏡油等產(chǎn)品被國(guó)內(nèi)科研工作者廣泛應(yīng)用。

 

生化試劑,即用型試劑,分子生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué)

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
貨號(hào) BV6008 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 谷胱gan肽還原酶(GR)活性測(cè)定試劑盒


谷胱gan肽還原酶(GR活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,是谷胱gan肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶之一通常昆蟲中 GR TrxR 取代)。GR 催化NADPH 還原GSSG 生成GSH,有助于維持體內(nèi) GSH/GSSG比值。GR 在氧化脅迫反應(yīng)中對(duì)活性氧清除起關(guān)鍵作用,此外GR 還參與抗壞血酸-谷胱gan肽循環(huán)途徑。

測(cè)定原理:

GR 能催化NADPH 還原GSSG 再生GSH,同時(shí)NADPH 脫氫生成NADP+NADPH 340 nm 有特征吸收峰,相反NADP+在該波長(zhǎng)無(wú)吸收峰;通過(guò)測(cè)定 340 nm 吸光度下降速率來(lái)測(cè)定 NADPH 脫氫速率,從而計(jì)算GR 活性。

谷胱gan肽還原酶(GR)活性測(cè)定試劑盒

組成:

產(chǎn)品名稱

BV6008-100T/96S

Storage

試劑一:液體

120ml

4℃

試劑二:粉劑

2

-20℃

試劑三:粉劑

2

-20℃

說(shuō)明書

一份

 

試劑二:粉劑×2 支,-20℃保存。臨用前加入 1.2ml 蒸餾水,混勻。試劑三:粉劑×2 支,-20℃保存。臨用前加入 0.6ml 蒸餾水,混勻。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)


自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 15min,取上清,置冰上待測(cè)。

 

2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(ml 500~10001 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加 1ml 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 8000g, 4℃,離心 15min,取上清置于冰上待測(cè)。

 

3. 血清等液體:直接測(cè)定。

操作步驟:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于 25℃(普通物質(zhì))或者 37℃(哺乳動(dòng)物)中預(yù)熱 30min。

3. 測(cè)定管:取微量石英比色皿或 96 孔板,依次加入 10μl 試劑三,20μl 試劑二,150μl 試劑一,20μl 上清液,混勻, 340nm 迅速測(cè)定初始吸光度和 180 s 吸光度,記為 A 測(cè) 1 A 測(cè) 2,A 測(cè)定管= A 測(cè) 1A測(cè) 2。

注意:

1、加完上清液后必須迅速混勻測(cè)定,保證準(zhǔn)確測(cè)初始反應(yīng)速度;

2、當(dāng)現(xiàn)初始 180s 內(nèi)吸光值不穩(wěn)定時(shí),可以適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,選取相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間段內(nèi)吸光值變化值;

3、當(dāng)所測(cè)A 測(cè)定管的值在零點(diǎn)附近徘徊時(shí),可能原因:(1樣本GR 酶活性低,建議濃縮樣本后再進(jìn)行測(cè)定;(2樣本GR 酶活性過(guò)高,吸光值變化區(qū)間過(guò)小無(wú)法準(zhǔn)確測(cè),建議樣本稀釋 2~5 倍后再進(jìn)行測(cè)定

計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109]÷[Cpr×V ]÷T

= 536×A 測(cè)定管÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每克樣本每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/g 鮮重)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109] ÷(W×V ÷V 樣總)÷T

= 536×A 測(cè)定管÷W

(3) 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/104 cell)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V ÷V 樣總)÷T

= 536×A 測(cè)定管÷細(xì)胞數(shù)量

4按液體體積計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每毫升液體每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/ml)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109]÷×V ÷T

= 536×A 測(cè)定管

εNADPH 摩爾消光系數(shù) 6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V 反總:反應(yīng)體系總體積,200μl=2×10-4 L;1061 mol=1×106μmol Cpr:上清液蛋白濃度(mg/ml);W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μl =2×10-2 ml;V 樣總:提取液體積,1 ml;V 樣總:提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,3 min。 b.使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109]÷[Cpr×V ]÷T

= 1072×A 測(cè)定管÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每克樣本每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/g 鮮重)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109] ÷(W×V ÷V 樣總)÷T

= 1072×A 測(cè)定管÷W

(3) 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/104 cell)= [ A 測(cè)定管÷ε÷d×V 反總×109] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V ÷V 樣總)÷T

=1072×A 測(cè)定管÷細(xì)胞數(shù)量

4按液體體積計(jì)算

活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每毫升液體每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個(gè)酶活單位。

GR 酶活(nmol/min/ml)= [ (A 測(cè)定管-A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷×V ÷T

=1072×A 測(cè)定管

εNADPH 摩爾消光系數(shù) 6.22×103L/mol/cm;d96 孔板光徑,0.5 cm;V 反總:反應(yīng)體系總體積,200μl=2×10-4 L;1061 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白濃度(mg/ml);W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μl =2×10-2 ml;V 樣總:提取液體積,1 mlV 樣總:提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,3 min。

注意事項(xiàng):

(1) 樣品處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行,且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力,勻漿液避免反復(fù)凍融;

(2) 試劑二和試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用,配制完后,置于冰上,未使用完的 4℃保存,三天內(nèi)使用完。

(3) 測(cè)定前須先用 12 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),哺乳動(dòng)物組織一般須用試劑一稀釋 25 倍。

(4) 細(xì)胞中 GR 活性測(cè)定時(shí),細(xì)胞數(shù)目須在 300 萬(wàn)-500 萬(wàn)之間,細(xì)胞中 GR 的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞。

谷胱gan肽還原酶(GR)活性測(cè)定試劑盒




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