BV6010 硫氧還蛋白氧化還原酶試劑盒 谷胱gan肽系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BV6010
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/7/18 8:55:00
- 訪問次數(shù) 90
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
---|---|---|---|
貨號 | BV6010 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
主要用途 | 硫氧還蛋白氧化還原酶試劑盒 |
硫氧還蛋白氧化還原酶(thioredoxin reductase, TrxR)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:
TrxR 是一種NADPH 依賴的包含FAD 結構域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR 與GR 活性類似,催化 GSSG 還原生成GSH,是谷胱gan肽氧化還原循環(huán)關鍵酶之一。
測定原理:
TrxR 催化NADPH 還原DTNB 生成TNB 和NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,通過測定 412nm波長處TNB 的增加速率,即可計算TrxR 活性。
硫氧還蛋白氧化還原酶試劑盒 谷胱gan肽系列
組成:
產(chǎn)品名稱 | BV6010-100T/96S | Storage |
試劑一:液體 | 120ml | 4℃ |
試劑二:液體 | 2ml | 4℃避光 |
試劑三:粉劑 | 1 管 | 4℃ |
說明書 | 一份 |
試劑三:粉劑×1 管,4℃保存。臨用前加入 2ml 蒸餾水溶解。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
自備儀器和用品:
低溫離心機、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104 個):試劑一體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g, 4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
TrxR 測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 412nm,用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動物)預熱 30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μl 試劑二,20μl 試劑三,160μl 試劑一,迅速混勻后于412 nm 測定 10 s 和 310 s 吸光度,記為 A1 和A2。△A 空白管=A2-A1。
4. 測定管:取微量玻璃比色皿或 96 孔板,加入 20μl 試劑二,20μl 試劑三,140μl 試劑一,20μl 上清液,迅速混勻后于 412 nm 測定 10 s 和 310 s 吸光度,記為A3 和A4。△A 測定管=A4-A3。
注意:空白管只需測定一次。
TrxR 活性計算公式:
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min /mg prot)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T
= 147×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min /g 鮮重)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
= 147×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
(3) 按細胞數(shù)量計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每 104 個細胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min/104 cell)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T
= 147×(△A 測定管-△A 空白管)÷ 細胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min /ml)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷V 樣÷T
= 147×(△A 測定管-△A 空白管)
ε:TNB 在 412nm 處的微摩爾消光系數(shù),0.0136 L/μ mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總:反應體系總體積(L),200μl=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應體系中上清液體積(ml),20μl=0.02 ml;V 樣總:提取液體積,1 ml;T:反應時間(min),5 min。
b.使用 96 孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min /mg prot)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T
= 294×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min /g 鮮重)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
= 294×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
(3) 按細胞數(shù)量計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每 104 個細胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min/104 cell)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T
= 294×(△A 測定管-△A 空白管)÷ 細胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個酶活單位。
TrxR(nmol/min /ml)=(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總÷V 樣÷T
= 294×(△A 測定管-△A 空白管)
ε:TNB 在 412nm 處的微摩爾消光系數(shù),0.0136 L/μ mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 反總:反應體系總體積(L),200μl=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測定;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應體系中上清液體積(ml),20μl=0.02 ml;V 樣總:提取液體積,1 ml;T:反應時間(min), 5 min。
注意事項:
1. 測定前須先取 1~2 個樣做預實驗,哺乳動物組織及血液制品TrxR 活力測定時,一般須用蒸餾水稀釋5 倍左右;測定過程操作須迅速。
2. 試劑二和試劑三配制好后 3 天內(nèi)使用完。