交聯(lián)法蛋白相互作用分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

生理?xiàng)l件下，大多數(shù)蛋白質(zhì)間相互作用持續(xù)時(shí)間很短，從而使得相互作用研究變得很困難。交聯(lián)試劑為這一問題提供了解決方案，即在蛋白質(zhì)相互作用時(shí)將它們共價(jià)交聯(lián)在一起，捕獲蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物，凍結(jié)短暫微弱的相互作用，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)短暫相互作用蛋白的分離和表征。交聯(lián)過程在體內(nèi)或體外都可以進(jìn)行，使用體內(nèi)還是體外交聯(lián)取決于項(xiàng)目的需求。兩者區(qū)別在于，蛋白質(zhì)在體內(nèi)交聯(lián)過程中以天然狀態(tài)交聯(lián)，而對(duì)于體外交聯(lián)，蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)生變性。 體內(nèi)交聯(lián) 體內(nèi)交聯(lián)反應(yīng)的過程中，蛋白質(zhì)交聯(lián)反應(yīng)發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)部，因此可以消除假陽性的相互作用及蛋白質(zhì)復(fù)合物穩(wěn)定性喪失的風(fēng)險(xiǎn)。位于細(xì)胞膜內(nèi)的蛋白質(zhì)通常使用疏水性和脂溶性交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，而位于細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)（如血漿錨定的受體）通常使用親水性和水溶性交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)。盡管蛋白質(zhì)保持天然狀態(tài)，但由于細(xì)胞中蛋白質(zhì)的復(fù)雜性，體內(nèi)交聯(lián)的優(yōu)化過程也可能很復(fù)雜，仍然存在發(fā)生非特異性交聯(lián)反應(yīng)的可能性，可以通過使用間隔臂較短的交聯(lián)劑來消除非特異性交聯(lián)的問題。 體外交聯(lián) 在體外交聯(lián)過程中，細(xì)胞被均質(zhì)化，裂解。因此，該方法更適合分析較穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。由于在特定的裂解緩沖液中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解，想要對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行控制變得比較容易，如溫度、pH、離子強(qiáng)度等反應(yīng)條件都可以進(jìn)行調(diào)整。因?yàn)椴辉谑艿襟w內(nèi)環(huán)境的限制，也有更多類型的交聯(lián)劑可供選擇，也可以更好的控制非特異性交聯(lián)。

交聯(lián)法蛋白質(zhì)相互作用分析

常見交聯(lián)類型

化學(xué)交聯(lián) 化學(xué)交聯(lián)劑通過在兩個(gè)或多個(gè)生物分子的特定氨基酸官能團(tuán)之間形成化學(xué)鍵而將相互作用的蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)域或多肽共價(jià)連接在一起，這些分子由于相互作用而緊密相鄰。根據(jù)項(xiàng)目的具體要求，許多商業(yè)化的化學(xué)交聯(lián)劑可供選擇，包括同源雙功能或異源雙功能交聯(lián)劑，長臂或短臂交聯(lián)劑，可裂解或不可裂解交聯(lián)劑，水溶性或非水溶性交聯(lián)劑等等。同源雙功能分子靶向蛋白質(zhì)上相同的功能基團(tuán)，而異源雙功能交聯(lián)劑能夠靶向不同蛋白質(zhì)上的不同官能基團(tuán)，可以實(shí)現(xiàn)更大的變異性或特異性交聯(lián)。交聯(lián)劑分子也可以設(shè)計(jì)成包含可裂解的元素，如酯或二硫鍵，以分別通過添加羥胺或還原劑來逆轉(zhuǎn)或破壞連接。疏水性的交聯(lián)劑，可以進(jìn)入疏水性蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域或穿過細(xì)胞膜；親水性的交聯(lián)劑，可以限制交聯(lián)至水性環(huán)境。 光敏交聯(lián) 由于將交聯(lián)劑添加到細(xì)胞懸液或細(xì)胞裂解物中可能導(dǎo)致許多非特異性交聯(lián)的形成，為了更好的分析蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用，還通過添加光敏基團(tuán)等方式，設(shè)計(jì)了更復(fù)雜的交聯(lián)劑。這些光敏基團(tuán)僅在選定的時(shí)間內(nèi)發(fā)生反應(yīng)，并僅對(duì)紫外線照射發(fā)生響應(yīng)。一端具有化學(xué)交聯(lián)基團(tuán)而另一端具有光敏基團(tuán)的異源雙功能交聯(lián)劑可通過兩個(gè)步驟與選擇的目標(biāo)蛋白發(fā)生反應(yīng)。

交聯(lián)法蛋白相互作用分析的特點(diǎn)

• 可對(duì)體內(nèi)瞬時(shí)蛋白質(zhì)間相互作用進(jìn)行分析 • 可對(duì)低親和力的體外蛋白質(zhì)間相互作用進(jìn)行分析 • 高檢測(cè)靈敏度

交聯(lián)法蛋白相互作用分析的一般工作流程

• 根據(jù)您的特定項(xiàng)目需求設(shè)計(jì)交聯(lián)方法和交聯(lián)劑類型：體內(nèi)/體外； 2. 反應(yīng)條件優(yōu)化，有針對(duì)性的結(jié)合樣品特性及項(xiàng)目需求，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化； 3. 細(xì)胞裂解，CoIP； 4. 蛋白免疫印跡/質(zhì)譜分析（根據(jù)項(xiàng)目需求而定）； 5. 數(shù)據(jù)分析及報(bào)告交付。

交聯(lián)法蛋白相互作用分析一站式服務(wù)

您只需下單-寄送樣品 百泰派克一站式服務(wù)完成：樣品處理-上機(jī)分析-數(shù)據(jù)分析-項(xiàng)目報(bào)告

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)蛋白質(zhì)的氨基酸組成分析，N端測(cè)序，C端測(cè)序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質(zhì)N端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的蛋白質(zhì)，提供基于從頭測(cè)序法的蛋白質(zhì)從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質(zhì)組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白質(zhì)組學(xué)、靶向蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白質(zhì)組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種蛋白質(zhì)標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質(zhì)、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

交聯(lián)法蛋白相互作用分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹