斯達特生物致力于為科研工作者提供高質(zhì)量的試劑盒產(chǎn)品和專業(yè)的技術(shù)支持。選擇我們的Mouse TNF-α OneStep ELISA Kit（S0C3023），您將獲得可靠的實驗結(jié)果和優(yōu)質(zhì)的售后服務(wù)，助力您的科研工作順利進行。

關(guān)于斯達特(Starter)，國產(chǎn)抗體專家：
杭州斯達特志在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個開發(fā)平臺：重組免單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗，重組蛋白開發(fā)平臺 (E.coli,CHO,HEK293,InsectCells)，已正式通過歐盟98/79/EC認證ISO9001認證ISO13485.

一步法ELISA試劑盒因操作簡便、耗時短，廣泛應(yīng)用于抗原/抗體檢測，但實驗過程中的細節(jié)把控直接影響結(jié)果準確性。以下是使用時的核心注意事項，涵蓋操作前、操作中及操作后全流程：  

一、操作前準備注意事項  

試劑盒與樣本準備  

試劑盒儲存：嚴格按照說明書溫度儲存（通常2-8℃，部分試劑需-20℃冷凍），避免反復(fù)凍融（尤其是酶結(jié)合物、標準品），取出后需在室溫（20-25℃）平衡30-60分鐘，確保各試劑溫度一致，減少誤差。  

試劑檢查：使用前核對試劑盒批號、有效期，觀察試劑是否渾濁、沉淀或變色（如酶結(jié)合物應(yīng)為澄清液體，顯色底物A/B液若發(fā)黃可能失效），包裝破損或異常試劑禁止使用。  

樣本處理：  

血清、血漿樣本需避免溶血（紅細胞破裂釋放過氧化物酶會干擾顯色），離心后取上清，避免脂血、纖維蛋白凝塊。  

組織勻漿、細胞培養(yǎng)液等樣本需按說明書處理（如稀釋、離心），確保無顆粒雜質(zhì)，必要時用0.22μm濾膜過濾。  

樣本應(yīng)新鮮檢測，若需保存，需分裝后-20℃或-80℃冷凍，避免反復(fù)凍融（建議≤3次）。  

實驗器材與環(huán)境  

耗材選擇：使用配套96孔板（不可混用不同批次板條，吸附性能可能差異），移液器需校準（推薦使用可調(diào)式移液器，吸頭一次性使用，避免交叉污染）。  

環(huán)境控制：實驗溫度保持20-25℃（溫差過大影響反應(yīng)效率），避免陽光直射、通風(fēng)過強或振動（如靠近離心機），實驗臺需清潔干燥，準備吸水紙、計時器。  

二、操作過程關(guān)鍵注意事項  

加樣操作  

順序與量：一步法需同時加入樣本和酶結(jié)合物（或按說明書特定順序），加樣時沿孔壁緩慢加入，避免產(chǎn)生氣泡（氣泡會導(dǎo)致讀數(shù)偏低），若有氣泡用針頭挑破。  

避免交叉污染：每加完一個樣本/試劑需更換吸頭，加樣后輕敲板邊緣使液體混勻，切勿劇烈震蕩（防止液體濺出污染相鄰孔）。  

標準品與質(zhì)控：標準品需按說明書梯度稀釋（稀釋液必須專用，不可用蒸餾水替代），每個濃度做復(fù)孔（通常2-3孔），同時設(shè)置空白對照（僅加顯色劑和終止液）和陰性/陽性對照，確保實驗有效性。  

溫育控制  

嚴格按照說明書時間和溫度溫育（如37℃孵育30分鐘），建議使用恒溫箱（避免用室溫替代，溫度波動會導(dǎo)致結(jié)果偏差），溫育時需加蓋板膜（防止蒸發(fā)濃縮或污染），板條應(yīng)水平放置，確保液體覆蓋孔底。  

溫育結(jié)束后及時取出，避免超時（可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加，背景升高）。  

洗滌步驟  

洗滌是減少背景的關(guān)鍵：使用專用洗滌液（按比例稀釋，避免用水替代），通過洗板機或手動加樣，每孔加液量需超過孔容量1/2（如每孔加300μL），浸泡30-60秒后棄去，重復(fù)3-5次（次數(shù)不足易殘留游離抗原/抗體，導(dǎo)致假陽性）。  

洗滌后需在吸水紙上拍干（切勿倒扣用力甩動，防止液體殘留交叉污染），確?？變?nèi)無可見液滴。  

顯色與終止  

顯色劑A、B需按比例混合（或分別加入），加樣后輕輕混勻，避光顯色（部分底物對光敏感），嚴格控制顯色時間（如15分鐘），觀察到標準品梯度顯色明顯后及時終止。  

終止液（通常為硫酸）需緩慢加入（避免劇烈反應(yīng)導(dǎo)致液體濺出），加樣順序與顯色劑一致，終止后輕輕震蕩混勻，確保顏色由藍色（TMB底物）變?yōu)辄S色，若仍為藍色可能終止不全。  

三、檢測與數(shù)據(jù)處理注意事項  

讀數(shù)時機：終止后10-30分鐘內(nèi)用酶標儀讀數(shù)（超過1小時可能因顏色消退導(dǎo)致結(jié)果偏低），選擇正確波長，讀數(shù)前確?？變?nèi)無氣泡、液體澄清（若有沉淀需離心后取上清）。  

結(jié)果判斷：  

復(fù)孔OD值差異應(yīng)≤10%，否則需重新檢測。  

空白對照OD值應(yīng)≤0.1（超過則可能試劑污染或洗滌不當(dāng)），陰性對照OD值需低于臨界值，陽性對照需高于臨界值，否則實驗無效。  

計算結(jié)果時需扣除空白對照OD值，按標準曲線計算樣本濃度，避免僅憑肉眼判斷顏色深淺。  

四、操作后注意事項  

試劑處理：剩余試劑需按原條件儲存（如酶結(jié)合物放回2-8℃，顯色劑避光保存），板條未用完部分需密封后2-8℃保存，標記使用日期。  

廢棄物處理：終止液含強酸，需中和后再倒入下水道，廢棄吸頭、板條按生物廢棄物處理，避免接觸皮膚。  

記錄與追溯：詳細記錄實驗日期、試劑批號、溫育時間、儀器型號等信息，便于結(jié)果追溯和問題排查。