試劑名稱：LysoSensor Green DND-189溶酶體綠色熒光探針；溶酶體綠色熒光探針LysoSensor DND-189

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

分子式：C24H22N4O2

分子量：398.46

一、描述與基本特性：

溶酶體綠色熒光探針LysoSensor DND-189用于測(cè)量活細(xì)胞中酸性細(xì)胞器（如溶酶體）pH值。

該探針在酸性環(huán)境中熒光增強(qiáng)，其 pKa 值約為 5.2 。

它適用于多種細(xì)胞類型，包括貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞 。

該探針的激發(fā)波長(zhǎng)為 443 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 505 nm，通常在熒光顯微鏡下觀察 。

此外，LysoSensor Green DND-189 也可用于流式細(xì)胞術(shù)和熒光光度計(jì)分析 。

注意事項(xiàng)：溶解性是在室溫下測(cè)定的，如果溫度過低，可能會(huì)影響其溶解性。

二、實(shí)驗(yàn)操作流程

【試劑準(zhǔn)備】

工作液配制：1 mM原液用培養(yǎng)基或緩沖液稀釋至≥1 μM（建議起始濃度），現(xiàn)配現(xiàn)用。

優(yōu)化建議：根據(jù)細(xì)胞膜通透性調(diào)整濃度，避免假陽性。

【染色步驟】

細(xì)胞類型：貼壁細(xì)胞

操作流程：

1. 細(xì)胞爬片至80%密度；

2. 37℃預(yù)熱工作液替換培養(yǎng)基，孵育30 min–2 h；

3. 新鮮培養(yǎng)基洗滌，熒光顯微鏡觀察。

細(xì)胞類型：懸浮細(xì)胞

操作流程：

1. 離心去上清，預(yù)暖工作液重懸；

2. 37℃孵育30 min–2 h；

3. 離心洗滌，重懸后檢測(cè)。

【儀器要求】

核心設(shè)備：熒光顯微鏡（濾光片：Ex 430–460 nm, Em 500–540 nm）。

擴(kuò)展應(yīng)用：流式細(xì)胞儀（需驗(yàn)證熒光衰減）、熒光酶標(biāo)儀（動(dòng)力學(xué)分析）。

三、與其他溶酶體探針對(duì)比

探針名稱：LysoSensor Green DND-189

Ex/Em (nm)：443/505

pKa： 5.2

特點(diǎn)：酸性增強(qiáng)，高靈敏度

適用場(chǎng)景：pH動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)

探針名稱：LysoTracker Green DND-26

Ex/Em (nm)：504/511

pKa：-

特點(diǎn)：非pH依賴性，長(zhǎng)效標(biāo)記

適用場(chǎng)景：溶酶體定位

探針名稱：LysoSensor Yellow/Blue

Ex/Em (nm)：384/540

pKa：4.2

特點(diǎn)：雙發(fā)射，寬pH響應(yīng)

適用場(chǎng)景：定量pH校準(zhǔn)

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