1. cKI小鼠模型的定義與核心原理

cKI（條件性敲入） 是在傳統(tǒng)KI（Knock-In）基礎上引入時空特異性調(diào)控的基因編輯模型，通過Cre-loxP系統(tǒng)實現(xiàn)基因表達的精準控制：

• 核心元件：

• LoxP-STOP-LoxP（LSL） ：插入靶基因前的轉(zhuǎn)錄終止序列，阻斷基因表達；Cre酶切除STOP后激活表達 。

• 組織特異性Cre工具鼠：驅(qū)動特定細胞/器官中Cre重組酶的表達（如Alb-Cre用于肝臟特異性表達）。

• 技術優(yōu)勢：

• 避免全身表達導致的發(fā)育致死或非靶向效應

• 模擬疾病相關基因的局部病理微環(huán)境 

2. 核心構建策略與流程

（1）CRISPR/Cas9介導的cKI模型構建

（2）經(jīng)典案例解析

• 報告基因示蹤模型：

• B-CAG-Upar-tdTomato cKI：LSL阻斷mUPAR與tdTomato表達；CMV-Cre激活后實現(xiàn)全組織示蹤 。

• Cubn-sGFP-P2A-nLacZ：腎臟特異性熒光標記 。

• 疾病人源化模型：

• B6-hLPA(CKI)/Alb-cre：肝臟特異性表達人源LPA基因，模擬高血脂與動脈粥樣硬化 。

3. 核心應用場景

（1）精準疾病機制研究

（2）藥物研發(fā)平臺

• 靶點驗證：人源化CYP450 cKI模型預測藥物代謝毒性 。

• 藥效評價：fu方苦參注射液（CKI）在放射性肺損傷模型中的抗炎機制 。

（3）前沿技術整合

• 光遺傳學調(diào)控：結合ChR2（光敏感通道）cKI小鼠精準操控神經(jīng)回路 。

• 單細胞測序驗證：scRNA-seq分析cKI模型腫瘤微環(huán)境重塑

4. 技術優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢

• 時空精準性：克服傳統(tǒng)KI模型的全身表達局限性 。

• 生理相關性：保留內(nèi)源基因調(diào)控機制（如啟動子特異性）。

• 多功能拓展：支持雙報告基因（如EGFP+tdTomato）或多基因共編輯 。

局限性

• 技術復雜度：需同步優(yōu)化Cas9編輯效率與同源重組設計 。

• Cre工具鼠限制：組織特異性Cre活性不足或滲漏表達影響結果 。

• 周期與成本：從構建到表型分析需6-12個月 。