新手指南：如何開始CUT&Tag分析？檢測技術服務詳情介紹

CUT&Tag作為一種染色質分析技術，以其靈敏度高、背景低、操作便捷而廣受歡迎。然而，許多剛接觸這一技術的新手可能會感到迷茫：如何快速上手并成功完成CUT&Tag實驗？本文為CUT&Tag新手提供詳細的入門指南，涵蓋了實驗設計、試劑選擇、實驗步驟及數據分析，幫助您輕松開啟CUT&Tag分析之路。

一、明確實驗目標與設計

在啟動實驗前，首先需要明確研究目的：

1、研究的染色質靶點（組蛋白修飾或轉錄因子）

2、樣本類型與細胞數量（推薦從1000-5000個細胞起步）

3、控制組選擇（IgG抗體或輸入樣本）

明確以上要素后，即可進行下一步的具體實驗設計。

二、bìbèi試劑與耗材清單

CUT&Tag分析成功的關鍵是選擇合適的試劑和耗材，以下為基礎bìbèi材料：

1、關鍵試劑

（1）一抗（Primary Antibody）：高特異性，推薦ChIP-grade抗體。

（2）蛋白A/G-Tn5轉座酶：核心酶復合物，推薦選用zhuānyè品牌，如百泰派克生物科技提供的高效穩(wěn)定Tn5融合蛋白。

（3）透化緩沖液與活化緩沖液：推薦使用商業(yè)試劑盒以減少誤差和提高穩(wěn)定性。

2、耗材準備

（1）低吸附管（low-bind tubes）

（2）PCR管（兼容qPCR與高通量測序）

（3）PCR試劑盒（高保真DNA聚合酶）

（4）DNA純化試劑盒

三、CUT&Tag實驗詳細步驟解析

下面逐步解析CUT&Tag分析的關鍵步驟，幫助新手快速上手：

dìyī步：細胞樣本處理與透化

收集細胞，推薦以PBS緩沖液洗滌1-2次，懸浮于透化緩沖液中孵育10分鐘，使細胞膜透化，便于抗體進入細胞核。

第二步：特異性一抗孵育

加入特異性一抗，4℃孵育1-2小時或過夜，確?？贵w充分結合靶蛋白。

第三步：蛋白A/G-Tn5偶聯(lián)酶復合物孵育

加入蛋白A/G-Tn5融合酶，室溫或4℃孵育1小時，使復合物jīngzhǔn靶向定位到染色質目標區(qū)域。

第四步：轉座反應（染色質片段化與標記）

加入Mg2?激活緩沖液，反應溫度37℃，反應時間通常為5-10分鐘。短時間的孵育確保高效且jīngzhǔn的片段化，避免過度剪切。

第五步：DNA釋放與PCR擴增

加入蛋白酶K并短暫加熱（50-55℃孵育30分鐘，隨后95℃孵育10分鐘），釋放標記好的DNA片段。使用PCR反應對標記好的DNA片段進行擴增，推薦高保真DNA聚合酶進行擴增，避免PCR引入的突變或偏差。

四、CUT&Tag測序與數據分析入門

CUT&Tag分析成功后，得到的DNA片段需要進行高通量測序與分析。數據分析一般包括以下步驟：

1、測序平臺選擇

常用Illumina平臺進行高通量測序，推薦測序深度為每個樣本1000萬-2000萬reads即可滿足多數分析需求。

2、數據質控（Quality Control）

使用FastQC、MultiQC工具進行數據質量檢測和評估。

3、數據比對與峰值（Peak）鑒定

常用的軟件包括：

（1）Bowtie2/BWA：進行測序片段比對至參考基因組。

（2）MACS2：CUT&Tag常規(guī)使用的峰值檢測工具。

4、下游分析與可視化

使用Integrative Genomics Viewer（IGV）可視化峰值和染色質分布情況。使用差異分析工具，如DESeq2或EdgeR，分析不同條件或細胞群體之間的表觀遺傳差異。

五、新手常見問題

1、實驗背景過高怎么辦？

盡可能減少反應時間，尤其是轉座反應環(huán)節(jié)。使用經驗證的高質量抗體，避免非特異結合。

2、擴增效率低，文庫DNA濃度不足？

可適當增加PCR循環(huán)次數（一般10-15個循環(huán)足夠）。檢查蛋白A/G-Tn5酶的活性及實驗步驟的正確性。

為幫助科研人員高效開展CUT&Tag分析，百泰派克生物科技精心優(yōu)化實驗流程，提供高質量的CUT&Tag技術支持：

• 提供高純度蛋白A/G-Tn5融合酶，確保實驗穩(wěn)定性和高效性。

• 嚴格質控的抗體庫，專為CUT&Tag實驗優(yōu)化設計。

• 全面的技術支持服務，協(xié)助新手迅速排除實驗障礙，快速獲得可靠數據。

新手科研人員只需遵循上述步驟，結合高質量的試劑與技術支持，便可輕松完成從實驗設計到數據分析的全流程。百泰派克生物科技致力于為科研人員提供jīngzhǔn可靠的CUT&Tag分析服務，幫助科研人員順利開啟表觀遺傳學研究新篇章。從現在起，和百泰派克生物科技一起，邁出CUT&Tag研究dìyī步，開啟更高效、更jīngzhǔn的表觀遺傳探索之路吧！

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

新手指南：如何開始CUT&Tag分析？檢測技術服務詳情介紹