N-糖與O-糖蛋白定量分析的流程對比與優(yōu)化建議檢測技術服務詳情介紹

糖基化是真核dànbáizhìzuì廣泛的翻譯后修飾之一，深度參與細胞通訊、受體識別、免疫調節(jié)和腫瘤發(fā)生等過程。N-糖與O-糖作為兩類核心修飾形式，雖同屬糖基化范疇，但在修飾機制、結構多樣性、分析策略方面存在顯著差異。本文對兩者在定量分析中的流程進行系統(tǒng)比較，并結合質譜技術發(fā)展，提出高效、jīngzhǔn的流程優(yōu)化建議。

一、N-糖與O-糖修飾特征概覽

N-糖修飾依賴于共識序列（Asn-X-Ser/Thr），由內質網和高爾基體內多步酶促反應生成，結構常表現為分支型復雜糖鏈。O-糖修飾則不依賴特定序列，直接在sīānsuān或sūānsuān殘基上添加糖基，結構類型和位點分布更加多樣，尤其在黏附分子、黏液蛋白等富集。

二、定量分析的核心流程構成

糖蛋白定量分析通常包括：

• 樣本預處理：蛋白提取、還原、烷基化以消除結構干擾

• 酶切策略：使用蛋白酶生成適于質譜分析的肽段

• 糖肽富集：通過HILIC、lectin親和或化學標記法選擇性分離

• 糖鏈處理：N-糖可酶促釋放，O-糖常需堿性化學法或衍生策略輔助

• 定量標記：采用TMT、iTRAQ等標記技術或基于MS信號強度的標簽自由策略

• 質譜檢測：LC-MS/MS實現糖肽識別、修飾位點定位與定量分析

• 數據處理：利用高分辨譜圖和算法識別糖肽結構，輸出定量結果

三、兩類糖蛋白分析流程對比

四、分析流程優(yōu)化建議

1、多酶組合提升位點覆蓋率

單一酶切策略常受限于修飾位點附近肽段的可識別性。推薦結合酶種（如Trypsin與Glu-C、Asp-N）協(xié)同切割，以提高N-糖和O-糖位點的覆蓋度和檢測靈敏度。

2、結合多種富集機制增強特異性

N-糖肽推薦結合lectin和HILIC串聯富集策略，提升特異性和回收率。O-糖肽建議采用基于肽段親水性、化學衍生和選擇性捕獲（如BEMAD）等復合富集方式，降低非特異背景。

3、定制化修飾位點識別策略

N-糖位點可利用18O水標記實現定量釋放并輔助定位。O-糖由于缺乏酶法釋放標記路徑，更需依賴ETD/EThcD等碎裂方式配合高分辨算法jīngzhǔn定位，推薦采用支持譜圖級別解析的算法如Byonic、O-Pair等。

4、引入高分辨率質譜平臺

高分辨LC-MS/MS系統(tǒng)能顯著提升低豐度糖肽的檢測通量和修飾解析能力。建議結合DIA或PRM策略對關鍵修飾位點實現高重復性定量，尤其適用于O-糖修飾研究。

5、強化生物信息學分析工具整合

當前O-糖組學數據解析仍面臨挑戰(zhàn)，包括數據庫覆蓋不足、糖肽預測準確性有待提升等問題。建議使用多引擎并行策略，結合人工干預和AI輔助識別，提升位點識別率和定量準確性。

百泰派克生物科技的zhuānyè支持

百泰派克生物科技基于高分辨質譜平臺，構建了覆蓋N-糖與O-糖蛋白定量的全流程分析體系。我們采用多重富集策略與優(yōu)化酶切流程，配合優(yōu)良的biāojìdìng量技術和深度譜圖解讀算法，為科研客戶提供高準確性、高覆蓋率的糖基化修飾定量服務。無論是基礎機制研究，還是疾病標志物開發(fā)，我們均可提供個性化解決方案與數據支持。如需進一步了解高通量糖蛋白組學解決方案，歡迎聯系我們！

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術優(yōu)良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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