如何通過Edman降解實現(xiàn)高效蛋白質(zhì)序列分析？實驗室指南檢測技術服務詳情介紹

Edman降解是一種經(jīng)典且高度特異的dànbáizhìN端序列分析技術，至今仍在結構dànbáizhì組學、抗體工程與生物藥研發(fā)中扮演著重要角色。盡管高分辨率質(zhì)譜技術日新月異，Edman降解因其對N端氨基酸的逐步解析能力，在某些特定應用場景中仍具有bùkětìdài的價值。本文將從實驗原理、操作流程、樣本準備、結果解析及常見問題出發(fā)，系統(tǒng)解析如何高效開展Edman降解實驗，助力科研人員獲得可靠的dànbáizhì序列信息。

一、什么是Edman降解？

Edman降解由Pehr Edman于1950年提出，是一種通過周期性化學反應從多肽N端逐個釋放氨基酸殘基并進行鑒定的技術。它的核心在于利用酚異硫氰酸酯（PITC）與N端氨基酸反應，形成可被裂解和分析的衍生物，從而實現(xiàn)序列的“逐步拆解”。與質(zhì)譜分析不同，Edman降解不依賴質(zhì)量電荷比（m/z），而是基于化學選擇性，因而在已知目標蛋白并需要驗證N端完整性、識別修飾或突變時尤為有效。

二、Edman降解的適用場景

雖然現(xiàn)代dànbáizhì組學多依賴質(zhì)譜，但Edman降解仍在以下情境中發(fā)揮著dútè優(yōu)勢：

• 重組蛋白或單克隆抗體的N端驗證

• 蛋白修飾或截斷的鑒定

• 用于驗證質(zhì)譜推測結果的準確性

• 無法離子化或質(zhì)譜響應弱的樣本

在百泰派克生物科技的實際項目中，我們常結合Edman降解與質(zhì)譜分析交叉驗證dànbáizhì序列，提升結果的可靠性。

三、Edman降解的基本流程

1、樣本固定（Immobilization）

Edman降解通常要求樣品被固定在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜或玻璃纖維片上，防止反應中蛋白丟失。通常通過SDS-PAGE轉(zhuǎn)膜完成，需避免使用干擾化學物質(zhì)如Tween-20。

2、N端氨基酸衍生化

使用酚異硫氰酸酯（PITC）與N端氨基反應，形成環(huán)狀PTH氨基酸衍生物。該反應在堿性條件下進行，對水敏感，因此對環(huán)境控制較為嚴格。

3、裂解與回收

加入無水酸使肽鏈裂解，釋放PTH氨基酸。該步驟需高效回收PTH產(chǎn)物以確保后續(xù)分析的靈敏度。

4、分析與鑒定

利用高效液相色譜（HPLC）或毛細管電泳分析PTH衍生物，通過保留時間匹配標準氨基酸來確認N端序列。

四、實驗成功的關鍵因素

為了獲得高質(zhì)量的序列數(shù)據(jù)，以下幾點尤為關鍵：

1、樣本純度

Edman降解對樣本純度要求jígāo。混雜蛋白會導致多重信號干擾，影響序列判斷。

2、N端可接近性

如果N端被封閉（如乙?；?、修飾或信號肽未切除），將無法進行Edman降解。預處理酶切或化學去修飾可能是必要步驟。

3、轉(zhuǎn)膜完整性

蛋白在電泳后轉(zhuǎn)膜過程中若發(fā)生降解或遷移失敗，亦會影響反應效率。

4、每循環(huán)反應效率

隨著反應周期增加，降解效率會逐步下降。通常建議讀取qián10–20個氨基酸。

五、Edman降解 vs 質(zhì)譜：如何選擇？

建議策略： 若關注N端序列完整性或修飾，Edman降解是優(yōu)選方法；若需獲取整體序列或高通量分析，質(zhì)譜更具優(yōu)勢。在百泰派克生物科技，我們提供Edman降解與高分辨質(zhì)譜相結合的綜合dànbáizhì測序方案，為客戶定制zuì合適的策略。

在百泰派克，我們擁有：

• 自動化Edman降解儀

• 標準化PVDF轉(zhuǎn)膜流程與樣本前處理體系

• 與高分辨質(zhì)譜聯(lián)合驗證方案

• 支持科研項目申報的完整技術資料與報告交付

無論您是進行單抗質(zhì)量驗證、N端修飾檢測，還是為藥物申報準備質(zhì)量研究數(shù)據(jù)，我們都可提供高靈敏、高可靠的dànbáizhì序列分析服務。

盡管Edman降解是一項“老牌技術”，但其在dànbáizhìN端序列解析領域仍具有dútè價值。尤其在結構驗證、生物制藥質(zhì)控和蛋白工程中，準確的N端信息往往是不可忽視的關鍵。如果您正在尋找高效、jīngzhǔn、可驗證的dànbáizhì序列分析服務，歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技。我們不僅提供技術，更提供zhídexìnlài的數(shù)據(jù)支持與科研合作伙伴關系。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

如何通過Edman降解實現(xiàn)高效蛋白質(zhì)序列分析？實驗室指南檢測技術服務詳情介紹