關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)遇到的常見(jiàn)問(wèn)題解決措施
一、判斷細(xì)胞污染的方法:
狀態(tài)1:細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁了,經(jīng)常見(jiàn)到是米湯樣,黃色液體,一般認(rèn)為細(xì)菌污染。
狀態(tài)2:細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動(dòng)的小黑點(diǎn),一般認(rèn)為是黑膠蟲(chóng)。
狀態(tài)3:胞培養(yǎng)基清亮,但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì),有可能就是真菌感染。
應(yīng)對(duì)措施:細(xì)胞污染了就直接扔了,還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈,并用紫外照射半小時(shí),防止再次污染。同時(shí)建議細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素(尤其是初學(xué)者)
二、胞培養(yǎng)過(guò)程中,細(xì)胞周圍包括細(xì)胞上有很多小黑點(diǎn)怎么辦?
策略1:用胰酶消化下來(lái)后,低速短時(shí)間離心,不同實(shí)驗(yàn)室不一樣,如果平時(shí)是1000轉(zhuǎn)5min的話,就可以改為700轉(zhuǎn)3min,用新的細(xì)菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞收集是少一點(diǎn),但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。
策略2:如果多次嘗試之后還是不干凈,就懷疑是否存在支原體污染了,用抗支原體藥就OK了。一般用上3~5天,細(xì)胞就干干凈凈了。
三、細(xì)胞胞質(zhì)疏松,狀態(tài)不好,養(yǎng)不起來(lái)怎么辦?
策略1:一般情況下,從血清下手就行,要么換好血清,要么提高血清濃度,血清濃度提高到15%~20%培養(yǎng)48h,換成正常10%的濃度,用高濃度的血清培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞有毒性。
策略2:血清下手之后可以同時(shí)采取提高細(xì)胞密度的方法,從培養(yǎng)瓶換到六孔板,12孔板等,細(xì)胞密度大,細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子多,腫瘤細(xì)胞通過(guò)旁分泌途徑促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
預(yù)防策略:細(xì)胞胞質(zhì)疏松,老化的原因在于細(xì)胞傳代次數(shù)比較多,胰酶消化時(shí)間太長(zhǎng),這時(shí)候,一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù),注意胰酶消化時(shí)間,胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松。有一招,元元沒(méi)試過(guò),可以嘗試,將細(xì)胞凍起來(lái),過(guò)段時(shí)間復(fù)蘇,細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)得比較好。
四、長(zhǎng)途運(yùn)輸過(guò)來(lái)裝滿培養(yǎng)液的細(xì)胞如何處理
很多人都會(huì)遇到從其他地方買(mǎi)來(lái)細(xì)胞或者快遞運(yùn)來(lái)細(xì)胞,裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細(xì)胞怎么處理的問(wèn)題。
第1步:先放37℃培養(yǎng)箱放置4小時(shí),這樣細(xì)胞在通過(guò)長(zhǎng)途跋涉以后得以穩(wěn)定,觀察細(xì)胞狀態(tài)。
第2步:將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基1:1稀釋,如果細(xì)胞狀態(tài)不好,可以將血清濃度提到15%,否則正常培養(yǎng),這樣有一個(gè)過(guò)渡期,不至于細(xì)胞換血清之后狀態(tài)不佳,15%的血清培養(yǎng)48h之后換成正常濃度培養(yǎng)。