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關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)遇到的常見(jiàn)問(wèn)題解決措施
一、判斷細(xì)胞污染的方法：
狀態(tài)1：細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁了，經(jīng)常見(jiàn)到是米湯樣，黃色液體，一般認(rèn)為細(xì)菌污染。
狀態(tài)2：細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動(dòng)的小黑點(diǎn)，一般認(rèn)為是黑膠蟲(chóng)。
狀態(tài)3：胞培養(yǎng)基清亮，但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì)，有可能就是真菌感染。
應(yīng)對(duì)措施：細(xì)胞污染了就直接扔了，還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈，并用紫外照射半小時(shí)，防止再次污染。同時(shí)建議細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素(尤其是初學(xué)者)
二、胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞周圍包括細(xì)胞上有很多小黑點(diǎn)怎么辦?
策略1：用胰酶消化下來(lái)后，低速短時(shí)間離心，不同實(shí)驗(yàn)室不一樣，如果平時(shí)是1000轉(zhuǎn)5min的話，就可以改為700轉(zhuǎn)3min，用新的細(xì)菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞收集是少一點(diǎn)，但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。
策略2：如果多次嘗試之后還是不干凈，就懷疑是否存在支原體污染了，用抗支原體藥就OK了。一般用上3～5天，細(xì)胞就干干凈凈了。
三、細(xì)胞胞質(zhì)疏松，狀態(tài)不好，養(yǎng)不起來(lái)怎么辦?
策略1：一般情況下，從血清下手就行，要么換好血清，要么提高血清濃度，血清濃度提高到15%～20%培養(yǎng)48h，換成正常10%的濃度，用高濃度的血清培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞有毒性。
策略2：血清下手之后可以同時(shí)采取提高細(xì)胞密度的方法，從培養(yǎng)瓶換到六孔板，12孔板等，細(xì)胞密度大，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子多，腫瘤細(xì)胞通過(guò)旁分泌途徑促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。
預(yù)防策略：細(xì)胞胞質(zhì)疏松，老化的原因在于細(xì)胞傳代次數(shù)比較多，胰酶消化時(shí)間太長(zhǎng)，這時(shí)候，一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù)，注意胰酶消化時(shí)間，胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松。有一招，元元沒(méi)試過(guò)，可以嘗試，將細(xì)胞凍起來(lái)，過(guò)段時(shí)間復(fù)蘇，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)得比較好。
四、長(zhǎng)途運(yùn)輸過(guò)來(lái)裝滿培養(yǎng)液的細(xì)胞如何處理
很多人都會(huì)遇到從其他地方買來(lái)細(xì)胞或者快遞運(yùn)來(lái)細(xì)胞，裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細(xì)胞怎么處理的問(wèn)題。
第1步：先放37℃培養(yǎng)箱放置4小時(shí)，這樣細(xì)胞在通過(guò)長(zhǎng)途跋涉以后得以穩(wěn)定，觀察細(xì)胞狀態(tài)。
第2步：將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基1:1稀釋，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，可以將血清濃度提到15%，否則正常培養(yǎng)，這樣有一個(gè)過(guò)渡期，不至于細(xì)胞換血清之后狀態(tài)不佳，15%的血清培養(yǎng)48h之后換成正常濃度培養(yǎng)。