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關于細胞培養(yǎng)過程中會遇到的常見問題解決措施

閱讀:2744        發(fā)布時間:2019-1-9

一、判斷細胞污染的方法: 

狀態(tài)1:細胞培養(yǎng)液變渾濁了,經(jīng)常見到是米湯樣,黃色液體,一般認為細菌污染。 
狀態(tài)2:細胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動的小黑點,一般認為是黑膠蟲。 
狀態(tài)3:胞培養(yǎng)基清亮,但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì),有可能就是真菌感染。 
應對措施:細胞污染了就直接扔了,還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈,并用紫外照射半小時,防止再次污染。同時建議細胞培養(yǎng)時,在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素(尤其是初學者) 

二、胞培養(yǎng)過程中,細胞周圍包括細胞上有很多小黑點怎么辦? 

策略1:用胰酶消化下來后,低速短時間離心,不同實驗室不一樣,如果平時是1000轉(zhuǎn)5min的話,就可以改為700轉(zhuǎn)3min,用新的細菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞,細胞收集是少一點,但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。 
策略2:如果多次嘗試之后還是不干凈,就懷疑是否存在支原體污染了,用抗支原體藥就OK了。一般用上3~5天,細胞就干干凈凈了。 

三、細胞胞質(zhì)疏松,狀態(tài)不好,養(yǎng)不起來怎么辦? 

策略1:一般情況下,從血清下手就行,要么換好血清,要么提高血清濃度,血清濃度提高到15%~20%培養(yǎng)48h,換成正常10%的濃度,用高濃度的血清培養(yǎng)時間過長對細胞有毒性。 
策略2:血清下手之后可以同時采取提高細胞密度的方法,從培養(yǎng)瓶換到六孔板,12孔板等,細胞密度大,細胞分泌的細胞因子多,腫瘤細胞通過旁分泌途徑促進細胞生長。 

預防策略:細胞胞質(zhì)疏松,老化的原因在于細胞傳代次數(shù)比較多,胰酶消化時間太長,這時候,一定要控制細胞傳代次數(shù),注意胰酶消化時間,胰酶消化時間過長,容易導致細胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松。有一招,元元沒試過,可以嘗試,將細胞凍起來,過段時間復蘇,細胞會長得比較好。 

四、長途運輸過來裝滿培養(yǎng)液的細胞如何處理
 
    很多人都會遇到從其他地方買來細胞或者快遞運來細胞,裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細胞怎么處理的問題。
 
第1步:先放37℃培養(yǎng)箱放置4小時,這樣細胞在通過長途跋涉以后得以穩(wěn)定,觀察細胞狀態(tài)。 
第2步:將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基1:1稀釋,如果細胞狀態(tài)不好,可以將血清濃度提到15%,否則正常培養(yǎng),這樣有一個過渡期,不至于細胞換血清之后狀態(tài)不佳,15%的血清培養(yǎng)48h之后換成正常濃度培養(yǎng)。 

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