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導(dǎo)致PCR假陽(yáng)性的污染源

2017-5-22  閱讀(5488)

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PCR反應(yīng)的特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問(wèn)題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。

一、標(biāo)本交叉污染源

收集標(biāo)本的容器:標(biāo)本放置時(shí),由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;

吸樣槍:標(biāo)本核酸模板在提取過(guò)程中,由于污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;

氣溶膠:zui可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式。在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管,開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆??珊?8000拷貝,因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題。

二、PCR試劑污染源

由于在PCR試劑配制過(guò)程中,由加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液等污染而導(dǎo)致的PCR試劑污染。

三、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染源

PCR反應(yīng)中zui主要zui常見(jiàn)的污染源。由于PCR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽(yáng)性。

四、克隆質(zhì)粒污染源:

克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高,活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒,由于活細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖的簡(jiǎn)便性及具有很強(qiáng)的生命力。故在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照的檢驗(yàn)室污克隆質(zhì)粒污染能性也很大。

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