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采用 CRISPR/Cas9介導敲入技術(shù)構(gòu)建

2017-6-13  閱讀(3064)

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         采用 CRISPR/Cas9介導敲入技術(shù)構(gòu)建可量化生產(chǎn)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定細胞系

從植物標本中提取的DNA是高度片段化的,因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進,已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此,德國科學家Rafal M. Gutaker等將這些改進方法應用到植物標本的DNA提取,并通過測序評估提取性能,該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進行準確評估。與使用十六烷基*基溴化銨(CTAB)提取相比,使用N-笨甲酰溴(PTB)緩沖液提取的中間片段長度減少35%,改進DNA與硅膜的結(jié)合條件可以額外減少10%。他們并未觀察到單鏈DNA長度的進一步降低和雙鏈DNA文庫的制備方法。這種方法能夠從植物標本中提取超短分子,這將幫助開啟儲存在標本室的遺傳信息。

 原文:

Rafal M. Gutaker , Ella Reiter , Anja Furtwängler . Extraction of ultrashort DNA

molecules from herbarium specimens. BioTechniques 62:76-79 (February 2017).

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