您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品分類品牌分類
-
混勻儀|混合器 氣體發(fā)生器 分光測色計(jì) 勻漿機(jī) 研磨機(jī) 超凈工作臺 洗板機(jī) 高低溫試驗(yàn)箱 恒溫金屬浴 電阻爐 溶劑過濾器 漩渦混合儀|旋渦混勻儀 均質(zhì)器 水槽 恒溫水槽 手套 培養(yǎng)板 生物安全柜 天平 滴定管 瓶口分液器 光澤儀 錐入度儀 濁度計(jì) 分析儀 冷藏保存箱 色差儀 超純水機(jī) 預(yù)制冷槽 油浴槽 冷卻水循環(huán)裝置 溶媒回收裝置 恒溫水浴槽 液氮罐 馬弗爐 酶標(biāo)儀 培養(yǎng)箱 電泳儀 潔凈工作臺 干燥箱 磁力攪拌器 滅菌器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 低溫冰箱 防爆冰箱 離心機(jī) 振蕩器 移液器 真空泵
PCR儀的使用和日常維護(hù)
閱讀：3445 發(fā)布時(shí)間：2021-2-5
PCR儀的使用方法
1.1.1.1 操作步驟
(1) 開機(jī)：打開開關(guān)，視窗上顯示“SELF TEST”，顯示10秒中后，顯示RUN-ENTER菜單：準(zhǔn)備執(zhí)行程序。
(2) 放入樣本管，關(guān)緊蓋子。
1.1.1.2 程序輸入與選擇
(1) 如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按《Proceed》，用箭頭鍵選擇已儲存的程序，按《Proceed》，則屏幕顯示：按《Proceed》選擇ENABLE，則開始執(zhí)行程序。
2
(2) 輸入新的程序：
在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM，按《Proceed》選擇NEW，命名新的程序，多8個字母，輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字)；輸入程序步驟：名字輸入后，顯示，按《Proceed》則可以輸入溫度(0～100℃)，按《Proceed》確認(rèn)后，則可以輸入孵育時(shí)間，用《Select》鍵移動光標(biāo)，輸入數(shù)字，完成后按《Proceed》確認(rèn)，跳到下一步，輸入方式同上；選擇GOTO，輸入循環(huán)步驟時(shí)鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)多可達(dá)9999次)(為實(shí)際循環(huán)數(shù)-1)。
選擇option,顯示：再選擇increment,按《Proceed》確認(rèn)，輸入初始的溫度，確認(rèn)后輸入時(shí)間，按《Proceed》確認(rèn)，然后輸入每個循環(huán)增加或減少的溫度，增加用正值，減少用負(fù)值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》確認(rèn)。
選擇extend，按《Proceed》確認(rèn),輸入每個循環(huán)增加或減少的時(shí)間(-60～60秒)，按《Proceed》確認(rèn)；選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》確認(rèn)，然后輸入加熱或致冷的速度，按《Proceed》確認(rèn)；選擇End，輸入結(jié)束步驟。
(3) 輸入完成的程序后，到RUN-ENTER菜單，選擇新程序，開始運(yùn)行。
(4) 其它：用《pause》可以暫停一個運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)
3
程序；用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。
(5) 編輯程序：
可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值，輸入新的值后按《Proceed》確認(rèn)。對于未輸完的程序，要先輸入END，按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。刪除已經(jīng)儲存的程序：從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇DELET,用《Select》選擇刪除。
(6) 查看程序的步驟：在主菜單上選擇LIST，按《Proceed》，用《Select》將選擇名稱，再按《Proceed》，顯示程序的 一步，用《Select》鍵向前、向后翻頁查看，此時(shí)不能改變程序的值。
(7) 編輯已有的程序：
從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM，按《Proceed》，顯示主菜單，選擇EDIT，按《Proceed》確認(rèn)，用《Select》鍵選擇要編輯的程序，按《Proceed》顯示程序的 一步。用《Select》鍵將光標(biāo)移到要改變的溫度或循環(huán)的值上，鍵入新值，按《Proceed》確認(rèn)，按《Cancel》刪除鍵入的值，出現(xiàn)空格，鍵入新值后確認(rèn)。注：一旦值被改變或刪除，原來的值不能恢復(fù)，必須重新鍵入。編輯時(shí)間值：必須重新鍵入小時(shí)、分鐘、秒，按《Proceed》。
1.1.1.3 PCR體系設(shè)置
如何設(shè)置一個PCR體系：一般分為8步：
4
(1) 預(yù)變性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。
(2) 變性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。
(3) 退火：溫度自定，30s~2min。
(4) 延伸：70～75℃，一般72℃，對于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。
(5) 循環(huán)數(shù)：一般25～35個循環(huán)。
(6) 終延伸：72℃，5～15min。
(7) 保存：10℃，時(shí)間設(shè)為0。
(8) END。
1.1.2 PCR儀使用中的一些小技巧
(1) 仔細(xì)閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發(fā)揮儀器的性能并避免發(fā)生錯誤。
(2) 程序設(shè)計(jì)完成后，一定要仔細(xì)檢查，以免出錯造成損失。
(3) 常用的程序 調(diào)用以前使用過的正確程序文件；樣品量較小時(shí)， 在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯(lián)管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩(wěn)定性。
(4) 在進(jìn)行各種試劑加樣時(shí)，相同的試劑要一起加后再分裝，要用同一只吸液器及同一個槍頭。
(5) 加樣完成后， 用酶聯(lián)板離心轉(zhuǎn)頭將管離心一下，使反應(yīng)液到管底，因?yàn)榉磻?yīng)液在管壁或管蓋上時(shí)，會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5
1.1.3 PCR儀的維護(hù)和保養(yǎng)
PCR儀器不是一種計(jì)量儀器，其主要作用原理與基本計(jì)量要素密切相關(guān)，要求較高，一旦失控，儀器將不能正常工作，所以PCR儀器也需要定期檢測和維護(hù)，這對依賴自然風(fēng)降溫的PCR儀器尤為重要。下面介紹一些具體的保養(yǎng)維護(hù)方法：
1.1.3.1 PCR儀的清洗
(1) 樣品池的清洗：先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。
(2) 熱蓋的清洗：對于熒光定量PCR儀，當(dāng)有熒光污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來自樣品池時(shí)，或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí)，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔干凈，無污物阻擋光路。
(3) 儀器外表面的清洗：清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。
(4) 更換保險(xiǎn)絲：先將PCR儀關(guān)機(jī)，拔去插頭，打開電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒，換上備用的保險(xiǎn)絲，觀察是否恢復(fù)正常。
1.1.3.2 PCR儀的維護(hù)
(1) PCR儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。
(2) PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的，當(dāng)檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1～2℃時(shí)，可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。
(3) PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時(shí)間控制，要求越短越好，當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s，就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
(4) 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí)，不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件，必要時(shí)要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。