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PCR儀的使用和日常維護(hù)
閱讀:3446 發(fā)布時(shí)間:2021-2-5
PCR儀的使用方法
1.1.1.1 操作步驟
(1) 開機(jī):打開開關(guān),視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后,顯示RUN-ENTER菜單:準(zhǔn)備執(zhí)行程序。
(2) 放入樣本管,關(guān)緊蓋子。
1.1.1.2 程序輸入與選擇
(1) 如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序,則直接按《Proceed》,用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序,按《Proceed》,則屏幕顯示:按《Proceed》選擇ENABLE,則開始執(zhí)行程序。
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(2) 輸入新的程序:
在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》選擇NEW,命名新的程序,多8個(gè)字母,輸入后按《Proceed》確認(rèn)(如何輸入字母、數(shù)字);輸入程序步驟:名字輸入后,顯示,按《Proceed》則可以輸入溫度(0~100℃),按《Proceed》確認(rèn)后,則可以輸入孵育時(shí)間,用《Select》鍵移動(dòng)光標(biāo),輸入數(shù)字,完成后按《Proceed》確認(rèn),跳到下一步,輸入方式同上;選擇GOTO,輸入循環(huán)步驟時(shí)鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)多可達(dá)9999次)(為實(shí)際循環(huán)數(shù)-1)。
選擇option,顯示:再選擇increment,按《Proceed》確認(rèn),輸入初始的溫度,確認(rèn)后輸入時(shí)間,按《Proceed》確認(rèn),然后輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的溫度,增加用正值,減少用負(fù)值(-0.1℃~6℃),按《Proceed》確認(rèn)。
選擇extend,按《Proceed》確認(rèn),輸入每個(gè)循環(huán)增加或減少的時(shí)間(-60~60秒),按《Proceed》確認(rèn);選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1~1.5℃)按《Proceed》確認(rèn),然后輸入加熱或致冷的速度,按《Proceed》確認(rèn);選擇End,輸入結(jié)束步驟。
(3) 輸入完成的程序后,到RUN-ENTER菜單,選擇新程序,開始運(yùn)行。
(4) 其它:用《pause》可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序,再按一次繼續(xù)
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程序;用《stop》或《Cancel》可停止運(yùn)行的程序。
(5) 編輯程序:
可以用《Cancel》鍵刪除輸錯(cuò)的值,輸入新的值后按《Proceed》確認(rèn)。對(duì)于未輸完的程序,要先輸入END,按《Proceed》將程序儲(chǔ)存后才能刪除。刪除已經(jīng)儲(chǔ)存的程序:從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇DELET,用《Select》選擇刪除。
(6) 查看程序的步驟:在主菜單上選擇LIST,按《Proceed》,用《Select》將選擇名稱,再按《Proceed》,顯示程序的 一步,用《Select》鍵向前、向后翻頁查看,此時(shí)不能改變程序的值。
(7) 編輯已有的程序:
從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇EDIT,按《Proceed》確認(rèn),用《Select》鍵選擇要編輯的程序,按《Proceed》顯示程序的 一步。用《Select》鍵將光標(biāo)移到要改變的溫度或循環(huán)的值上,鍵入新值,按《Proceed》確認(rèn),按《Cancel》刪除鍵入的值,出現(xiàn)空格,鍵入新值后確認(rèn)。注:一旦值被改變或刪除,原來的值不能恢復(fù),必須重新鍵入。編輯時(shí)間值:必須重新鍵入小時(shí)、分鐘、秒,按《Proceed》。
1.1.1.3 PCR體系設(shè)置
如何設(shè)置一個(gè)PCR體系:一般分為8步:
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(1) 預(yù)變性:可用94~95℃,2~10min,一般用5min。
(2) 變性:一般用94℃,30s~2min,一般45s~1min。
(3) 退火:溫度自定,30s~2min。
(4) 延伸:70~75℃,一般72℃,對(duì)于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。
(5) 循環(huán)數(shù):一般25~35個(gè)循環(huán)。
(6) 終延伸:72℃,5~15min。
(7) 保存:10℃,時(shí)間設(shè)為0。
(8) END。
1.1.2 PCR儀使用中的一些小技巧
(1) 仔細(xì)閱讀儀器使用說明書,這樣可以充分發(fā)揮儀器的性能并避免發(fā)生錯(cuò)誤。
(2) 程序設(shè)計(jì)完成后,一定要仔細(xì)檢查,以免出錯(cuò)造成損失。
(3) 常用的程序 調(diào)用以前使用過的正確程序文件;樣品量較小時(shí), 在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯(lián)管,這樣可使熱蓋平整,加熱效果好,有利于效果的穩(wěn)定性。
(4) 在進(jìn)行各種試劑加樣時(shí),相同的試劑要一起加后再分裝,要用同一只吸液器及同一個(gè)槍頭。
(5) 加樣完成后, 用酶聯(lián)板離心轉(zhuǎn)頭將管離心一下,使反應(yīng)液到管底,因?yàn)榉磻?yīng)液在管壁或管蓋上時(shí),會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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1.1.3 PCR儀的維護(hù)和保養(yǎng)
PCR儀器不是一種計(jì)量儀器,其主要作用原理與基本計(jì)量要素密切相關(guān),要求較高,一旦失控,儀器將不能正常工作,所以PCR儀器也需要定期檢測(cè)和維護(hù),這對(duì)依賴自然風(fēng)降溫的PCR儀器尤為重要。下面介紹一些具體的保養(yǎng)維護(hù)方法:
1.1.3.1 PCR儀的清洗
(1) 樣品池的清洗:先打開蓋子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開PCR儀,設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行,讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5~10min即可。
(2) 熱蓋的清洗:對(duì)于熒光定量PCR儀,當(dāng)有熒光污染出現(xiàn),而且這一污染并非來自樣品池時(shí),或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí),需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔干凈,無污物阻擋光路。
(3) 儀器外表面的清洗:清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對(duì)PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。
(4) 更換保險(xiǎn)絲:先將PCR儀關(guān)機(jī),拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒,換上備用的保險(xiǎn)絲,觀察是否恢復(fù)正常。
1.1.3.2 PCR儀的維護(hù)
(1) PCR儀器需要定期檢測(cè),視制冷方式而定一般半年至少一次。
(2) PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的,當(dāng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1~2℃時(shí),可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。
(3) PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時(shí)間控制,要求越短越好,當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s,就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對(duì)風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵;對(duì)其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
(4) 一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí),不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件,必要時(shí)要請(qǐng)專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。