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瘧疾（malaria）是瘧原蟲經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險(xiǎn)發(fā)作。常見檢測(cè)方法為間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧原蟲抗體。
[檢測(cè)方法]
[方法學(xué)原理] 抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合，zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。
[試劑]
1．0．01mol／LpH7．6 PBS
2．熒光標(biāo)記抗人IgG抗體
3．陰性對(duì)照、陽性對(duì)照血清
4．抗原片
[檢測(cè)步驟]
1．用鉛筆將抗原片（厚血膜）劃成12個(gè)小格，放置蒸餾水中浸泡2～3min，以脫去血紅蛋白，吹干。
2．用無水乙醇固定10min，吹干。
3．將被檢血清用PBS從1：10開始作倍比稀釋，將此稀釋血清分別加在小格中，每格1小滴，同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。
4．將抗原片放濕盒中置37C環(huán)境中孵育30min，棄去殘余血清，用PBS洗3次，每次3min，用蒸餾水漂洗一遍以脫鹽，吹干。
5．將已稀釋的熒光標(biāo)記抗人IgG抗體加于各小格中心，每格1小滴，同上孵育，漂洗吹干，熒光顯微鏡檢。
[結(jié)果判斷] 陽性結(jié)果小格內(nèi)有與原蟲胞漿結(jié)構(gòu)相似的明亮熒光；陰性結(jié)果原蟲胞漿結(jié)構(gòu)模糊無熒光。陰陽性對(duì)照結(jié)果無誤，實(shí)驗(yàn)成立。
[正常參考值] 正常人抗體效價(jià)≤1：10，但瘧疾流行區(qū)的正常人（成人）抗體效價(jià)稍高。
[注意事項(xiàng)]
1．具有較多裂殖體的血片，陽性檢出率高，因?yàn)榀懺x的裂殖體的抗原性zui強(qiáng)。
2．采用厚血膜做抗原片時(shí)，經(jīng)溶血后瘧原蟲容易變形，故觀察結(jié)果時(shí)要認(rèn)真辨認(rèn)（必要時(shí)可做瑞氏染色對(duì)照）以排除非特異性熒光。
3．加被檢血清時(shí)，要防止互相串格。
[臨床意義] 被檢血清≥1：20陽性，表明瘧原蟲感染。流行區(qū)人們抗體陽性檢出率較高。有學(xué)者報(bào)道患者抗體陽性率為55．1％，明顯高于血膜染色檢查法（陽性率28．1％）。間日瘧患者經(jīng)*后熒光抗體的陽性率迅速下降。值得注意的是，已*10余年的人群中尚有8％的人存在低滴度抗體水平。由此可見，本試驗(yàn)結(jié)果陽性的意義不在于診斷，而在于流行病學(xué)調(diào)查。
