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上海寶葉生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·6年
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[檢測方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加HRP標(biāo)羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，在此基礎(chǔ)上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 不抗凝靜脈血2ml
[試劑]
1．日本分體血吸蟲可溶性抗原
2．HRP標(biāo)記羊抗人IgG
3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液
4．稀釋液和洗滌液
5．酶底物液
6．2mol／LH2504溶液
7．正常人（陰性對照）血清
[檢測步驟]
1．日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原用pH9．6碳酸鹽緩沖液作1：3 000稀釋，包被反應(yīng)板，每孑岫口lOOtA，置4℃環(huán)境中過夜。
2．用前洗滌包被板3min× 3，加被檢血清，每份標(biāo)本做3孔，每孔lOOgl，另加正常人（陰性對照）血清2孔。37C環(huán)境中保溫2h，洗滌3minX3。
3．加HRP-抗人IgG，每孔100gl，37℃環(huán)境中放置2h，洗滌3rainX3。
4．加酶底物液每孔100~1，于室溫環(huán)境中避光保存30min，各孔加2mol／L H2S04 1滴終止反應(yīng)，用酶標(biāo)比色儀490nm測各孔A值。
[參考范圍] 血吸蟲抗體陰性
[注意事項(xiàng)]
1．待檢血清應(yīng)新鮮或冰凍保存，不能污染。
2．在實(shí)驗(yàn)室的全部洗滌過程中，清洗要*，以除去末參與反應(yīng)的所有物質(zhì)。
3．試劑盒應(yīng)保存于4一-20C冰箱中，用前取出，待試劑恢復(fù)至室溫后使用。
[臨床意義] 糞便中蟲卵陽性者血清中抗體檢出率為97％以上，正常人有2％～3％假陽性。不同種屬寄生蟲無明顯交叉反應(yīng)。1979年，Tamaka應(yīng)用ELISA間接法測日本分體血吸蟲患者抗體陽性率為100％。本法具有高度的敏感性，但有1％一2．3％假陽性，對同種屬曼氏和埃及血吸蟲有交叉反應(yīng)。
