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酶聯(lián)法檢測血吸蟲抗體

2012-10-10  閱讀(2004)

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[檢測方法]  ELISA法

    [方法學(xué)原理]  將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)形成固相抗原,加待檢血清,如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物;再加HRP標(biāo)羊抗人IgG抗體,形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標(biāo)記抗體復(fù)合物,在此基礎(chǔ)上加酶底物顯色,顏色深度與抗體含量成正比。
    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  不抗凝靜脈血2ml
    [試劑]
    1.日本分體血吸蟲可溶性抗原
    2.HRP標(biāo)記羊抗人IgG
    3.0.05mmol/LpH9.6碳酸鹽緩沖液
    4.稀釋液和洗滌液
    5.酶底物液
    6.2mol/LH2504溶液
    7.正常人(陰性對照)血清
    [檢測步驟]
    1.日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原用pH9.6碳酸鹽緩沖液作1:3 000稀釋,包被反應(yīng)板,每孑岫口lOOtA,置4℃環(huán)境中過夜。
    2.用前洗滌包被板3min× 3,加被檢血清,每份標(biāo)本做3孔,每孔lOOgl,另加正常人(陰性對照)血清2孔。37C環(huán)境中保溫2h,洗滌3minX3。
    3.加HRP-抗人IgG,每孔100gl,37℃環(huán)境中放置2h,洗滌3rainX3。
    4.加酶底物液每孔100~1,于室溫環(huán)境中避光保存30min,各孔加2mol/L H2S04 1滴終止反應(yīng),用酶標(biāo)比色儀490nm測各孔A值。
    [參考范圍]  血吸蟲抗體陰性
    [注意事項(xiàng)]
    1.待檢血清應(yīng)新鮮或冰凍保存,不能污染。
    2.在實(shí)驗(yàn)室的全部洗滌過程中,清洗要*,以除去末參與反應(yīng)的所有物質(zhì)。
    3.試劑盒應(yīng)保存于4一-20C冰箱中,用前取出,待試劑恢復(fù)至室溫后使用。
    [臨床意義]  糞便中蟲卵陽性者血清中抗體檢出率為97%以上,正常人有2%~3%假陽性。不同種屬寄生蟲無明顯交叉反應(yīng)。1979年,Tamaka應(yīng)用ELISA間接法測日本分體血吸蟲患者抗體陽性率為100%。本法具有高度的敏感性,但有1%一2.3%假陽性,對同種屬曼氏和埃及血吸蟲有交叉反應(yīng)。

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