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線粒體膜勢能的檢測

2013-4-2  閱讀(1755)

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線粒體在細(xì)胞凋亡的過程中起著樞紐作用,多種細(xì)胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細(xì)胞發(fā)生凋亡,而線粒體跨膜電位的下降,被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程中zui早發(fā)生的事件,它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線粒體DYmt崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
   線粒體跨膜電位的存在,使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可結(jié)合到線粒體基質(zhì),其熒光的增強(qiáng)或減弱說明線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。
   方法:將正常培養(yǎng)的細(xì)胞和誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞加入使用終濃度為Rhodamine 123(1mM)或終濃度為DiOC6(25nM),JC-1(1mM),TMRM(100nM),37°C平衡30min,流式細(xì)胞計(jì)檢測細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。
   注意事項(xiàng)
   1. 始終保持平衡染液中pH值的一致性,因?yàn)閜H值的變化將影響膜電位。
   2. 與染料達(dá)到平衡的細(xì)胞懸液中如果含有蛋白,他們將與部分染料結(jié)合,降低染料的濃度,引起假去極化。

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