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免疫學(xué)技術(shù)專題:斑點(diǎn)金免疫滲濾測定法(DIGFA)

2014-6-3  閱讀(2284)

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基本原理

斑點(diǎn)金免疫滲濾測定法是在斑點(diǎn)免疫滲濾測定法基礎(chǔ)上,改用膠體金標(biāo)記物代替酶,省去底物顯色的步驟。試驗(yàn)方法是以硝酸纖維素膜(NC膜)為載體,將試劑及標(biāo)本滴加在膜上,通過滲濾而逐步反應(yīng)。全過程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成,陽性結(jié)果在膜上呈紅色斑點(diǎn)。

試劑及材料

1. 滲濾裝置:為一塑料小盒(4x3x0.6cm),分為底、蓋兩層,蓋的中央有一個(gè)直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強(qiáng)的墊料,蓋孔下,緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋,即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點(diǎn)加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原,室溫自然干燥,保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。

2. 封閉液:含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。

3. 洗滌液:50mol/L,pH7.2 PBS。

4. 特異性抗體(一抗)或抗原

5. 金標(biāo)抗體

操作方法

1. 取出滲濾器,先在小孔的NC膜上,滴加2滴(約100ml)封閉液;

2. 待其滲入盒內(nèi),在NC膜上,加待檢標(biāo)本1滴(約50ml);

3. 待其滲入盒內(nèi),在NC膜上,滴加2滴(約100ml)洗滌液;

4. 待其滲入盒內(nèi),在NC膜上,加金標(biāo)抗體1滴(約50ml),使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應(yīng);

5. 待其滲入盒內(nèi),在NC膜上,滴加2滴(約100ml)洗滌液;

6. 至洗滌液*滲入盒內(nèi)

結(jié)果觀察

在小孔NC膜上出現(xiàn)紅色反應(yīng)時(shí)為陽性反應(yīng),陰性反應(yīng)不著色。

注意事項(xiàng)

1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標(biāo)本和金標(biāo)抗體的用量事先都必須應(yīng)用方陣法確定zui適用量。

2. 盒底充填的墊料吸水性要強(qiáng),否則影響結(jié)果。

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