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重組細胞因子溶解

2014-12-25  閱讀(1447)

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1.離心(Centrifuge):高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。


2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/ml)。溶解時不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:


 1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;


 2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。


3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據(jù)自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周,如需長期保存,在稀釋液中加入10%的FCS(小?;蛱ヅQ澹┗?.1 %的BSA(牛血清白蛋白)或5% HAS(人血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白,然后需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-50℃以下)。分裝時每管中工作液的體積是一次實驗的用量,以實現(xiàn)每次實驗用完一支工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。


細胞因子量極微,所以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮魇潜匦璧?,任何不適當(dāng)?shù)娜芙舛紩斐蓪嶒灥氖?,造成大量的浪費。請謹(jǐn)慎操作!

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