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基質(zhì)膠應(yīng)用(1) —皮下成瘤實驗全攻略

2025-5-28  閱讀(162)

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導(dǎo) 語


想評估抗癌藥物療效?研究腫瘤生長機制?皮下成瘤實驗是腫瘤研究中的經(jīng)典模型!但如何規(guī)范操作確保實驗成功率?需要哪些關(guān)鍵試劑?本文為您一一解析!


PART.01

皮下成瘤實驗

皮下成瘤(Subcutaneous Tumorigenesis)是將腫瘤細(xì)胞接種到小鼠皮下,模擬腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的體內(nèi)實驗?zāi)P汀R蚱洳僮骱啽?、成瘤周期短、可視化強,被廣泛用于:

? 抗腫瘤藥物療效評價;

? 腫瘤發(fā)生機制研究;

? 免疫治療及基因治療開發(fā)。

PART.02

實驗步驟


準(zhǔn)備對數(shù)期生長的、細(xì)胞密度達(dá)80 - 90%左右的HepG2細(xì)胞,于收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。


胰酶消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓未脫離培養(yǎng)皿時,去除胰酶,加入PBS/無血清培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液,離心清洗一次,重懸至終濃度為1×108個細(xì)胞/mL。


將細(xì)胞懸液和Ceturegel™高濃度基質(zhì)膠在4℃環(huán)境下按1:1比例進(jìn)行稀釋,制備成終濃度為5×107個細(xì)胞/mL(Ceturegel™基礎(chǔ)濃度基質(zhì)膠建議濃度在70%以上)。


左手抓取固定裸鼠,于裸鼠右肩處皮下注射,接種時,針頭在皮下進(jìn)針深一點,約1 cm深,以減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出,接種體積為200 μL。(這一過程盡量在半小時內(nèi)完成,途中細(xì)胞懸液放在冰上以減緩細(xì)胞凋亡及防止出現(xiàn)凝膠現(xiàn)象)。


將裸鼠放回籠內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng),1周~1月左右可看到腫瘤出現(xiàn),并根據(jù)實驗設(shè)計在腫瘤體積達(dá)到要求時對裸鼠進(jìn)行安樂si,并拍照。

PART.03

實驗結(jié)果

基質(zhì)膠應(yīng)用(1) —皮下成瘤實驗全攻略
圖.HepG2裸鼠成瘤實驗

PART.04

常見問題及解答

常見的荷瘤不成功可能的原因?

Q
A

① 細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實驗的關(guān)鍵,所以細(xì)胞生長狀態(tài)一定要好,取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞達(dá) 80 - 90% 左右密度為宜,收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
② 可能是小鼠周齡太大,一般選擇 4 - 6 周齡裸鼠,小于 4 周可能不耐受過早死亡,大于 6 周免疫力會增強,不易成瘤。
③ 可能是小鼠免疫排斥,建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠。
④ 接種部位也是成瘤實驗的重要因素。選擇血管豐富且易操作的部位接種,如腋下、腹股溝、側(cè)腹部及頸背部等部位,其中腋下中后部皮下較好,成瘤率高,比較推薦打腋下,一人操作很方便,后續(xù)量瘤子也很好操作。

腫瘤長起來后又消失的原因?

Q
A

腫瘤生長過程中,如果出現(xiàn)腫瘤塊先縮小,后變大的現(xiàn)象,很可能是由于炎癥反應(yīng),腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收造成的。繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過幾周還能長出來,如若后續(xù)腫瘤依舊未長出來,可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。

PART.05

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠

40183ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free基質(zhì)膠

40187ES

1.5 mL/5 mL/10 mL

PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red胰酶溶液(0.25%),含酚紅

40126ES

100 mL

PBS(1×)細(xì)胞培養(yǎng)級

41403ES

500 mL




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