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CRISPR/Cas9 質(zhì)粒-New

閱讀:3058      發(fā)布時(shí)間:2015-10-27
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Santa Cruz 新品- CRISPR/Cas9 質(zhì)粒-New

CRISPR/Cas9基因敲除質(zhì)粒

1)每個(gè)Knockout 質(zhì)粒產(chǎn)品設(shè)計(jì)為3個(gè)質(zhì)粒,確保對特定基因識別和剪切效率達(dá)到zui大。每個(gè)質(zhì)粒編碼*的20個(gè)核苷酸,序列來自GeCKO文庫。

2Cas9/gRNA 復(fù)合體與靶DNA PAMNGG)位點(diǎn)結(jié)合,并解旋DNA

gRNAPAM位點(diǎn)附件的靶位點(diǎn)特異結(jié)合。

3)通過3個(gè)gRNA的向?qū)В?/span>Cas93個(gè)特定位點(diǎn)對目的基因的5’外顯子進(jìn)行剪切。

二、HDR 同源修復(fù)質(zhì)粒

1)每個(gè)HDR產(chǎn)品包含了3種質(zhì)粒,這三種質(zhì)粒對相應(yīng)的CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒導(dǎo)致的缺口特異性修復(fù)。

2HDR質(zhì)粒為DSB提供特定的修復(fù)模板

3)每個(gè)HDR質(zhì)粒包含兩個(gè)800堿基對同源臂,可特異的與相應(yīng)的cas9誘導(dǎo)的雙鏈DNA破壞位點(diǎn)周圍的基因組DNA結(jié)合。

4)與敲除質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時(shí),HDR質(zhì)粒的puro基因,用于篩選穩(wěn)定的敲除克隆。

5)每個(gè)嘌呤霉素抗性基因兩側(cè)各有一個(gè)Loxp位點(diǎn),便于Cre載體進(jìn)一步處理。

三、雙切口酶質(zhì)粒(Double Nickase Plasmids

1)每個(gè)雙切口酶質(zhì)粒由一對各自編碼 D10A突變型Cas9核酸酶和特異性20nt 組成,與CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒相比,具有更高的特異性。

2)成對gRNA序列設(shè)計(jì)為大約5-20個(gè)堿基對的偏移,所形成的DNA雙切口被識別為功能性雙鏈斷裂。

3)每個(gè)casn/sgNA復(fù)合物在與向?qū)?/span>RNA互補(bǔ)的DNA鏈僅產(chǎn)生一個(gè)切口。

4)使用成對的向?qū)?/span>RNA可提高特異性且可zui低化脫靶效應(yīng)。

四、CRISPR/dCas 激活質(zhì)粒

1)用于激活內(nèi)源基因的表達(dá)。包含三種質(zhì)粒,幾個(gè)修飾組件形成協(xié)同激活介質(zhì)(SAM)復(fù)合體,這個(gè)SAM復(fù)合體代表了迄今為止,zui有效的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)。

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