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ABTS自由基清除能力測(cè)試試劑盒酶標(biāo)板法使用說(shuō)明

時(shí)間:2020/5/19閱讀:12482
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ABTS自由基清除能力測(cè)試試劑盒

(A005-96T 酶標(biāo)板法)

一、測(cè)定原理

采用ABTS(2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt)評(píng)價(jià)樣品抗氧化能力初由Miller等(1993)提出,現(xiàn)采用的一般是后來(lái)Re等(1999)改進(jìn)后的方法。該方法利用ABTS可被過(guò)硫酸鉀、過(guò)氧化氫、二氧化錳等一系列化合物氧化,生成藍(lán)綠色的ABTS+陽(yáng)離子自由基,在734nm處有大吸收峰。在抗氧化劑的作用下,ABTS+還原成無(wú)色的ABTS。通過(guò)測(cè)定734nm處的吸光值,即可判定反應(yīng)物的抗氧化能力。

二、試劑組成

試劑一:ABTS試劑300μL × 1支

試劑二:液體試劑300μL × 1支

試劑三:1mM Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml×1支(乙醇配制)

三、儲(chǔ)存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存6個(gè)月。

四、試劑的配制

ABTS應(yīng)用液:將試劑二小心全部轉(zhuǎn)入試劑一管內(nèi),旋好管蓋,搖勻,室溫放置12-16h,得到ABTS濃縮液。取10μLABTS濃縮液,采用稀釋液(稀釋液先采用純水20×稀釋)稀釋至734nm處吸光度為0.65-0.75,記下稀釋倍數(shù)(通常稀釋倍數(shù)為50-200倍,可先從80-100倍區(qū)間內(nèi)開(kāi)始嘗試。)將剩余濃縮液按稀釋倍數(shù)稀釋,得到ABTS應(yīng)用液,避光存放。

Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液:如您需要將樣品的ABTS自由基清除能力表示為Trolox當(dāng)量(TEAC),則需要同步測(cè)定Trolox的ABTS清除能力;如您僅需要將結(jié)果表示為ABTS自由基清除率,則您可以忽略此步驟(可以不需要用到試劑三)。

五、操作步驟

 

空白孔

測(cè)定孔

對(duì)照孔1

ABTS應(yīng)用液(μL)

200

200

 

樣品溶液(μL)

 

20

20

稀釋液(μL)2

20

 

200

充分混勻,室溫避光靜置30min3使之充分反應(yīng)。734nm處采用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值。

1如樣品顏色較淺可不做對(duì)照管(即認(rèn)為對(duì)照為0);

2稀釋液即您配制樣品的溶劑,一般為水、乙醇、PBS等;

2建議反應(yīng)30min,數(shù)值更為準(zhǔn)確,但一般快速測(cè)定時(shí),反應(yīng)10min即可(參考文獻(xiàn):)。

     六、注意事項(xiàng)

1. 如樣品中色素物質(zhì)不是分析對(duì)象,建議先進(jìn)行脫色處理,處理后樣品可不做對(duì)照孔;

2. 如不確定樣品的ABTS自由基清除能力,可先做不同濃度的稀釋液進(jìn)行摸索,并選擇適宜濃度進(jìn)行測(cè)定,高濃度下,濃度與清除率間并不線性相關(guān)。Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制建議選取100-1000μM的濃度進(jìn)行分析;

3. 混勻很重要,建議加樣時(shí)反復(fù)吹打,加樣結(jié)束后劇烈振搖酶標(biāo)板30秒以上(液體不能濺出來(lái))。

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