錳過氧化物酶（Manganese peroxidase，Mnp）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

錳過氧化物酶（EC1.11.1.13）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，主要存在于擔子菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物，疊氮化合物、DTT，多環(huán)芳烴等。

測定原理：

錳過氧化物酶在 Mn²⁺存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在 465nm 有特征吸收峰。

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試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

酶液提取：

1、組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測。

2、細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 4℃，10000g離心 10min，取上清置于冰上待測。

3、培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 465nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測定前將試劑一、二、三、四在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）放置 10min 以上。

在 1 ml 玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄 465nm 下 30s 時的吸光值A1 和2min30s 后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。

注意事項

若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三、四按比例配成混合液，在 37℃（哺乳動物）或 25℃

（其它物種）放置 10min 以上，測定時加入 100µl 樣本和 900µl 混合液測定。

酶活計算公式：

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol 愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。 MnP 活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr 2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化 1nmol 愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP 活性（nmol/min/g 鮮重）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×109] ÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T= 413×ΔA÷W 3．按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：每 104 個細胞每分鐘氧化 1nmol 愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP 活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109] ÷（V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣總）÷T= 413×ΔA÷細胞數(shù)量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升培養(yǎng)液每分鐘氧化 1nmol 愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

MnP 活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T= 413×ΔA

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應總體積，1×10-3L； V 樣：反應中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，2min

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