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戴安并聯(lián)色譜技術(shù)在生化蛋白樣品及單克隆 抗體分析中的應(yīng)用

閱讀:461      發(fā)布時(shí)間:2018-5-26
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生物制藥是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中發(fā)展zui為迅速的部分,以單克隆抗體藥物為 標(biāo)志,目前已批準(zhǔn)35個(gè)抗體藥物上市,用于癌癥、自身免疫、黃斑變 性、血液病和感染治療等[1]。在生物制藥的每個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié),產(chǎn)品的純化和分 析過程都至關(guān)重要。早期抗體的質(zhì)量控制過程中,必須測(cè)定樣品的效價(jià)、聚 集體和電荷亞型。單克隆藥物(MAb)產(chǎn)品中兩個(gè)主要的雜質(zhì)是電荷亞型單 抗和單抗聚集體,這些副產(chǎn)物會(huì)產(chǎn)生與主產(chǎn)品不同的藥效,有時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重 的副作用,如抗藥性抗體的形成。蛋白聚體是在生產(chǎn)過程、純化或者運(yùn)輸過 程中產(chǎn)生(如溫度,pH的影響)。本文討論了采用一套HPLC系統(tǒng)(UltiMate 3000鈦系統(tǒng))同時(shí)實(shí)現(xiàn)單克隆抗體的聚集體的分離和電荷亞型的分離。

測(cè)試條件 儀器:UltiMate 3000鈦系統(tǒng),包括帶有在線脫氣 單元的雙三元梯度泵;帶有生物兼容的十通閥;WPS- 3000T(B)FC分析型,帶樣品收集功能的自動(dòng)進(jìn)樣器; 紫外檢測(cè)器(UV);二極管陣列檢測(cè)器(DAD)。系統(tǒng) 連接見圖1。 離子交換色譜(IEC右泵) Thermo Scientific MAbPac SCX -10(4 mm i.d. ×250 mm )色譜柱陽離子交換模式分離單克隆抗體的電 荷亞型

色譜條件: 流動(dòng)相A:20 mM MES緩沖鹽,60 Mm NaCl ,pH5.6 流動(dòng)相B:20 mM MES緩沖鹽,300 Mm NaCl , pH5.5 梯度分離條件:30 min內(nèi)15-45%B;6 min 100%B清 洗;10 min 15%B平衡 流速:1.0 mL/min 檢測(cè)波長:280 nm 溫度:30 ℃

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