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賽默飛色譜及質(zhì)譜

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采用TSQ Quantis分析尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯

閱讀:1339      發(fā)布時(shí)間:2019-5-28
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目的:采用液相色譜與三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),為尿液中 EtG 和 EtS 的法醫(yī)毒物學(xué)分析開發(fā)耐用靈敏的 LC-MS/MS 分析工作流程。

前言:*,乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)和硫酸二乙酯(EtS)可作為監(jiān)測乙醇消耗量的生物標(biāo)志物。雖然它們是乙醇的次生代謝產(chǎn)物,但由于半衰期較長,因此可在法醫(yī)研究中被用于檢測過去是否服用過酒精。

實(shí)驗(yàn):
樣品制備:將等體積(50 µL)尿液與內(nèi)標(biāo)化合物(5000 ng/mL EtG-d5 和 500 ng/mL
EtS-d5)混合,然后用 900 µL 的水稀釋 20 倍。將 5 µL 樣品進(jìn)樣至 LC-
MS/MS 系統(tǒng)。

 

液相色譜方法
采用 Thermo Scientific TM VanquishTM Flex HPLC 系統(tǒng)和Phenomenex ® Synergi TM Hydro 反相色譜柱(100×3 mm,2.5 µm 粒徑)進(jìn)行色譜分離。流動(dòng)相 A 和 B 分別為含0.1% 甲酸的水和含 0.1% 甲酸的甲醇溶液,溶劑分別為Fisher Chemical TM Optima TM 級水和甲醇。總運(yùn)行時(shí)間為6 分鐘。

質(zhì)譜方法
采用配置加熱電噴霧電離探針的
TSQ Quantis 三重四極桿質(zhì)譜進(jìn)行分析。表 1 顯示了質(zhì)譜儀的離子源參數(shù)

分析 EtG、EtS 及其氘化內(nèi)標(biāo)化合物時(shí)同時(shí)監(jiān)測了兩種選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM)離子對,用于離子比率確認(rèn)(IRC)。在分時(shí)選擇反應(yīng)監(jiān)測(t-SRM)模式下進(jìn)行掃描,循環(huán)時(shí)間為 0.4 秒。表 2 顯示了本次分析中使用的 SRM 離子對信息。

 

數(shù)據(jù)分析:采用 Thermo Scientific TM TraceFinder  TM 軟件采集并處理數(shù)據(jù)。

 

評價(jià)
通過分析校正曲線,然后同一樣品重復(fù)進(jìn)樣六次作為質(zhì)控樣(QC),測定分析精密度和準(zhǔn)確度。通過 17 個(gè)不同批次人尿液中的內(nèi)標(biāo)信號(hào)評價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。

 

結(jié)果與討論
將 EtG 和 EtS 的定量限(LOQ)定義為根據(jù)線性校正曲線反算得到的校正物濃度位于理論值 20% 范圍內(nèi)、離子比率在目標(biāo)物 20% 范圍內(nèi)且重復(fù)進(jìn)樣的 %RSD 低于20% 時(shí)的低濃度。正常尿液中 EtG 和 EtS 的 LOQ 分別為 100 ng/mL 和 10 ng/mL。圖 1 顯示了各分析物在LOQ 下的提取離子流圖。圖 2 顯示了兩種化合物的校正曲線。

重復(fù)進(jìn)樣校正濃度范圍內(nèi)的質(zhì)控樣品時(shí),該方法呈現(xiàn)出*的精密度。EtG 的 %RSD 小于 9.8%,EtS 的 %RSD小于 4.0%。此外,17 個(gè)不同批次的正常受試尿液中未觀察到明顯的基質(zhì)效應(yīng)。圖 3 顯示了與校正樣品相比,不同批次尿液的內(nèi)標(biāo)峰面積回收率。

結(jié)論:

TSQ Quantis 三重四極桿質(zhì)譜儀為尿液中 EtG 和 EtS的分析提供了的靈敏度和耐用性。
• 采用該方法分析尿液中的 EtG 和 EtS 時(shí),定量限分別為 100 ng/mL 和 10 ng/mL。
• 該方法適用于法醫(yī)毒物學(xué)分析

 

更多產(chǎn)品信息請點(diǎn)擊:TSQ Quantis 三重四極桿質(zhì)譜儀

 

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