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內(nèi)毒素清除劑 使用說明

來源:上海索寶生物科技有限公司   2010年10月24日 23:17  

 

內(nèi)毒素清除劑
 

目錄號
包裝
價格
產(chǎn)地
 
50ml
Solarbio
 
100ml
Solarbio

 
產(chǎn)品簡介:
本公司生產(chǎn)的內(nèi)毒素清除劑主要用于清除DNA、蛋白質(zhì)或其他液體樣品中的內(nèi)毒素。在特定的pH值、鹽濃度和溫度條件下,內(nèi)毒素清除劑能與DNA、重組蛋白以及液體樣品中的內(nèi)毒素特異性結(jié)合,經(jīng)過室溫高速離心后,DNA或蛋白質(zhì)等保留在水相,而內(nèi)毒素則被濃縮到極小體積的下層相而被清除。經(jīng)過3次以上重復(fù)抽提后可將活性為500050000 EU/ml的內(nèi)毒素水平降低到50.5 EU/ml以下,即降低100010000倍。本試劑4℃可儲存半年,-20℃長期儲存。
 
操作步驟:
提取前請將內(nèi)毒素清除劑放在冰上冰浴5min,期間翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次使試劑均勻預(yù)冷。
1a)已純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素清除:吸取500μl DNA溶液于微型離心管,加入1/10體積3M NaAc pH5.21/20體積5M NaCl溶液,冰浴5min。
   b)在提取質(zhì)粒DNA過程中清除內(nèi)毒素:以堿裂解法提取質(zhì)粒為例,在加入裂解液和中和液并離心去除碎片之后,吸取含質(zhì)粒DNA的上清于新離心管中,冰浴5min。
2、加入1/5體積預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑,振蕩混勻,溶液變渾濁。
3、冰浴5min,溶液應(yīng)變清亮。
4、37℃水浴5min,不時振蕩,溶液又變渾濁。
5、12000rpm室溫離心5min,溶液應(yīng)分為兩相,上層水相含DNA,下層油狀相含內(nèi)毒素。
6、將含DNA的上層水相轉(zhuǎn)移到新管,棄油狀相,重復(fù)抽提三次,即重復(fù)步驟2-6三次。
7、加入2.5體積無水乙醇,-20℃沉淀30min或過夜;12000rpm離心10min,棄上清;70%乙醇洗滌沉淀,12000rpm離心5min棄上清;空氣干燥沉淀,加入100200μl無內(nèi)毒素的高純水或TE溶解沉淀。
8、用內(nèi)毒素檢測試劑測定樣品中內(nèi)毒素活性,并與初始樣品比較。
  
注意事項:
1DNA濃度>1mg/ml時清除內(nèi)毒素效率降低。由于DNA和蛋白質(zhì)本身的性質(zhì),清除程序可導(dǎo)致10-20DNA丟失,所幸的是與清除內(nèi)毒素的艱難相比DNA更容易提取制備。
2、所有溶液應(yīng)用無內(nèi)毒素的高純水配制,所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發(fā)性水溶液可高壓120℃高溫處理。
 
內(nèi)毒素簡介:
內(nèi)毒素(endotoxin)原稱熱原,是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜及其它微生物細胞壁的主要組成成分,其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖,主要由O-特異性鏈、核心多糖和類脂A三部分組成。脂多糖共價連接到非極性的疏水性類脂A(Lipid A)形成帶負電荷的大分子,同時還具有一個親水性的寡糖核,因而具有疏水和親水雙重性質(zhì)。制備質(zhì)粒DNA和重組蛋白時,細菌破壁之后將釋放大量脂多糖。無論是普通制備純化程序,還是離子交換、凝膠排阻過濾,甚至是氯化銫超速離心等制備程序,脂多糖任不可避免地與DNA或蛋白質(zhì)牢固結(jié)合而被共同純化。脂多糖具有強烈的免疫活性和細胞毒性,并能產(chǎn)生多種復(fù)雜的細胞生物學(xué)效應(yīng),大多數(shù)情況下會明顯干擾并產(chǎn)生不可預(yù)測的實驗結(jié)果。例如在DNA轉(zhuǎn)染實驗中,內(nèi)毒素競爭性干擾轉(zhuǎn)染試劑與DNA的結(jié)合,顯著降低轉(zhuǎn)染效率,并產(chǎn)生明顯細胞毒性降低外源基因表達水平。

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