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QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑 QuickShttleTM Transfection Reagents

來源:上海索寶生物科技有限公司   2010年11月21日 17:18  

QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑www.shsolarbio.com
QuickShttleTM Transfection Reagents
(#KX0110041,0.8 ml )
產(chǎn)品描述:
QuickShuttle是上海索萊寶生物科技有限公司新近研發(fā)的陽離子轉(zhuǎn)染試劑,具有、低毒和易于使用等優(yōu)點,推薦用于哺乳動物細胞和昆蟲細胞的瞬時轉(zhuǎn)染以及穩(wěn)定細胞系構(gòu)建,可以將轉(zhuǎn)染實驗操作縮短到一分鐘即可完成。
重要提示:
1、以24孔細胞板轉(zhuǎn)染實驗為例,推薦一次(即每孔)轉(zhuǎn)染實驗的低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為2ug,轉(zhuǎn)染試劑用量為3-5ul(轉(zhuǎn)染試劑的適用量需要根據(jù)不同細胞和不同培養(yǎng)基來優(yōu)化,但理論上不超出3-5ul范圍),轉(zhuǎn)染實驗中使用無菌生理鹽水稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑即可。
2、為獲得高轉(zhuǎn)染效率并盡可能降低細胞毒性,建議轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在50-80%范圍內(nèi),而且在不影響轉(zhuǎn)染效率的前提下,盡可能減少轉(zhuǎn)染試劑的用量。
3、QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑極大簡化了轉(zhuǎn)染步驟,轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒混合后無需室溫靜置孵育,可直接加入含血清的細胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染,而且無需在轉(zhuǎn)染后補加血清和更換培養(yǎng)基。
4、如果實驗?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細胞系,使用QuickShuttle進行轉(zhuǎn)染實驗可做進一步簡化,即細胞傳代后可直接進行轉(zhuǎn)染實驗,從而節(jié)省了18-24小時的轉(zhuǎn)染前細胞培養(yǎng)時間。
5、QuickShuttle轉(zhuǎn)染試劑建議儲存溫度為2-8℃,但在-30℃到室溫范圍內(nèi)均可長時間穩(wěn)定保存。
轉(zhuǎn)染步驟:
下述所有實驗步驟均針對哺乳動物貼壁細胞在24孔細胞板中的轉(zhuǎn)染實驗優(yōu)化建立,不同細胞和不同培養(yǎng)基可能需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑的用量以獲得佳實驗效果。質(zhì)粒DNA:請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。稀釋液:0.85%(W/V)生理鹽水,高壓消毒或除菌過濾。
1.轉(zhuǎn)染前18-24小時接種細胞到24孔細胞板中,每孔5-10*104細胞,1ml*培養(yǎng)基。備注:如果篩選抗藥性穩(wěn)定細胞系,可以考慮簡化的實驗步驟,即在細胞傳代后直接按下述步驟2-5進行轉(zhuǎn)染實驗,無需18-24小時的等候時間。
2.將2ug質(zhì)粒DNA和3-5ul轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到50ul生理鹽水中。備注:轉(zhuǎn)染試劑的適用量需要根據(jù)不同細胞和不同培養(yǎng)基來優(yōu)化,但理論上不超出3-5ul范圍。
3.合并上述兩溶液并混勻。備注:無需其他轉(zhuǎn)染試劑所需的10-30分鐘的等待時間。
4.將上述復合物直接加入到24孔細胞板中的細胞培養(yǎng)基中,輕搖細胞板以混勻。備注:轉(zhuǎn)染復合物可直接加入含血清的細胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染實驗。在極少情況下會出現(xiàn)貼壁細胞脫落現(xiàn)象,可先從待轉(zhuǎn)染細胞孔中吸取500μl培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復合物預混后再加入細胞中;若在細胞瓶中進行轉(zhuǎn)染,直接加入到無細胞貼壁的側(cè)面并搖勻即可。
5.將細胞板移至37℃/5%CO2孵箱中進行培養(yǎng)。備注:無需在轉(zhuǎn)染后4-6小時補加血清或更換培養(yǎng)基。
6.24-72小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。
附表:
培養(yǎng)器皿
表面積(cm2)
培養(yǎng)基用量(ml)
DNA用量(μg)/生理鹽水用量(μl)
轉(zhuǎn)染試劑用量(μl)/生理鹽水用量(μl)
96孔板
0.4
0.2
0.4/25
0.8/25
24孔板
2
1
2/50
4/50
12孔板
4
1.5-2
4/50
8/50
6孔板(包括35mm培養(yǎng)皿)
9
2-3
8-10/100
16-20/100
60mm培養(yǎng)皿
27
6-8
20-25/200
40-50/200
25 cm2培養(yǎng)瓶
25
6-8
20-25/200
40-50/200
100mm培養(yǎng)皿
75
15-20
40-50/400
80-100/400
75 cm2培養(yǎng)瓶
75
20-25
40-50/400
80-100/400

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