alamarBlue的用法
貼壁細胞和非貼壁細胞都適用。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞,因為微生物污染也會還原alamarBlueTM,培養(yǎng)基中應添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、兩性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時,細胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上, 1、 細胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當?shù)目股兀?/div> 2、 細胞覆蓋率達80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細胞。 3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng) 4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預定的時間點檢測其還原度。 |
貼壁細胞和非貼壁細胞都適用。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞,因為微生物污染也會還原alamarBlueTM,培養(yǎng)基中應添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、兩性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時,細胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上, 1、 細胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當?shù)目股兀?/div> 2、 細胞覆蓋率達80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細胞。 3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng) 4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預定的時間點檢測其還原度。 |
貼壁細胞和非貼壁細胞都適用。所有操作在無菌條件下進行。避免污染細胞,因為微生物污染也會還原alamarBlueTM,培養(yǎng)基中應添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、兩性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時,細胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上, 1、 細胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當?shù)目股兀?/div> 2、 細胞覆蓋率達80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細胞。 3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng) 4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預定的時間點檢測其還原度。 |
氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。
在特殊系統(tǒng)中使用時,細胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。
收集需檢測的細胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上,
1、 細胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當?shù)目股兀?/div>
2、 細胞覆蓋率達80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細胞。
3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng)
4、 到預定的時間點后檢測alamarBlueTM的還原情況
注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處
研究特殊藥物對細胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預定的時間點檢測其還原度。
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