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分析ATCC細胞培養(yǎng)技術(shù)注意事項

來源:上海谷研實業(yè)有限公司   2017年05月18日 13:46  

1.ATCC細胞實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。
 
2. 無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
 3. 小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
 4. 工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之ATCC細胞應特別小心操作,并選擇適當?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少 Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol 之產(chǎn)生,并避免尖銳針頭之傷害等。
 5. 定期檢測下列項目: 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。 5.3. 無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(wǎng)(300小時/預濾網(wǎng),3000 小時/HEPA)。
 6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水
 7. 認真按照操作規(guī)程進行實驗,一般不大會導致污染,很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實驗失敗,粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個月,如在-20度存放時間可長一些,但也不要超過3-4個月,可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,但我在過去的4年里一直是作原代 細胞培養(yǎng) 的,細胞嬌弱,經(jīng)驗表明放置時間不宜過長。
 8. 許多塑料制品也可以高壓消毒,例如培養(yǎng)瓶蓋,膠塞,吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,當然如果 money有限,如進口的培養(yǎng)板、皿等,也可以重復使用1-2次,我當時使用方法是將其*清潔后,使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,我做過多次,沒有出現(xiàn)問題。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,不要重復使用,如一定要重復用,可用環(huán)氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)
 在光鏡下,上皮細胞通常呈“鋪路石”樣排布,細胞之間有拉絲現(xiàn)象(即距離較遠的細胞可以通過細長的觸手相連),細胞有成片生長的特性。而間質(zhì)細胞通常呈梭形,沒有有成片生長的特性,ATCC細胞之間的不緊密。

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