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非限制性體干細(xì)胞的分離

來(lái)源:上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司   2011年01月04日 12:06  

                               非限制性體干細(xì)胞的分離

非限制性體干細(xì)胞(USSCs)的分離

試劑和材料: 
1. 起始培養(yǎng)基;
2. 擴(kuò)增培養(yǎng)基;
3. 0.05%胰蛋白酶,含EDTA;
4. PBSA;
5. T25培養(yǎng)瓶;
 
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 制備和分離臍帶血來(lái)源的MNCs(CB-MNCs);
2. 如果使用凍存的CB-MNCs,復(fù)蘇的細(xì)胞可以用于培養(yǎng),不需要其他分離步驟;
3. 用起始培養(yǎng)基按5×106 —7×106個(gè)細(xì)胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中;
4. 將細(xì)胞放在37℃,5%CO2的條件下培養(yǎng),2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細(xì)胞因子;
5. 形成USSC集落后,在擴(kuò)增培養(yǎng)基中擴(kuò)增細(xì)胞;
6. 將細(xì)胞放在37℃,5%CO2的條件下培養(yǎng);
7. 到達(dá)80%匯合后,用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細(xì)胞,并按1:3比例傳代,在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng);


 

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