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非限制性體干細(xì)胞的分離
非限制性體干細(xì)胞（USSCs）的分離
試劑和材料：
1. 起始培養(yǎng)基；
2. 擴(kuò)增培養(yǎng)基；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. PBSA；
5. T25培養(yǎng)瓶；
1. 起始培養(yǎng)基；
2. 擴(kuò)增培養(yǎng)基；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. PBSA；
5. T25培養(yǎng)瓶；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 制備和分離臍帶血來(lái)源的MNCs（CB-MNCs）；
2. 如果使用凍存的CB-MNCs，復(fù)蘇的細(xì)胞可以用于培養(yǎng)，不需要其他分離步驟；
3. 用起始培養(yǎng)基按5×106 —7×106個(gè)細(xì)胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中；
4. 將細(xì)胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)，2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細(xì)胞因子；
5. 形成USSC集落后，在擴(kuò)增培養(yǎng)基中擴(kuò)增細(xì)胞；
6. 將細(xì)胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)；
7. 到達(dá)80%匯合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細(xì)胞，并按1：3比例傳代，在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)；
1. 制備和分離臍帶血來(lái)源的MNCs（CB-MNCs）；
2. 如果使用凍存的CB-MNCs，復(fù)蘇的細(xì)胞可以用于培養(yǎng)，不需要其他分離步驟；
3. 用起始培養(yǎng)基按5×106 —7×106個(gè)細(xì)胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中；
4. 將細(xì)胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)，2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細(xì)胞因子；
5. 形成USSC集落后，在擴(kuò)增培養(yǎng)基中擴(kuò)增細(xì)胞；
6. 將細(xì)胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)；
7. 到達(dá)80%匯合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細(xì)胞，并按1：3比例傳代，在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)；
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