Western blotting是一個(gè)步驟繁多的實(shí)驗(yàn)，每一步都會(huì)對(duì)zui后的結(jié)果產(chǎn)生影響，電泳過程是其中關(guān)鍵重要的一步。好的電泳能讓目的條帶整齊，結(jié)果圖讓人眼前一亮。要做好電泳也并非易事，凝膠質(zhì)量在其中扮演著重要作用。
電泳的支持介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠，該凝膠的聚合由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體在自由基的催化下完成。常用的催化聚合方法有兩種，分別為化學(xué)聚合法和光聚合法，實(shí)驗(yàn)室配制凝膠通常為化學(xué)聚合。在聚合過程中，TEMED催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基引發(fā)丙烯酰胺單體聚合，同時(shí)甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產(chǎn)生甲叉鍵交聯(lián)，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

聚丙烯酰胺凝膠有兩種形式：SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)和非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)。
     SDS-PAGE和Native-PAGE的區(qū)別在于在樣品和凝膠中是否加入還原劑和SDS。在SDS-PAGE中，蛋白的遷移率只取決于分子量的大小而不受蛋白質(zhì)原來的電荷和形狀的影響。Native-PAGE依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)。 

根據(jù)凝膠孔徑可以分為單一濃度凝膠和梯度凝膠。梯度凝膠從凝膠頂部到底部丙烯酰胺的濃度呈梯度變化，高濃度的丙烯酰胺溶液首先加入到玻璃平板的底部，而后溶液濃度呈梯度下降，因此在凝膠的頂部孔徑較大，而在凝膠的底部孔徑較小。梯度凝膠電泳也通常加入SDS，并有濃縮膠，電泳過程與SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳基本類似。

使用梯度凝膠的優(yōu)點(diǎn)有以下幾點(diǎn)：

      1．梯度凝膠的分離范圍更寬，可以同時(shí)分離較大范圍分子量的蛋白質(zhì)。單一凝膠電泳對(duì)于分子量超過其分離范圍的蛋白質(zhì)，過大或過小，都不能分離。而梯度凝膠孔徑范圍比單一凝膠大，分子量較大的蛋白質(zhì)可以在凝膠頂部大孔徑部分得到分離，而分子量較小的蛋白質(zhì)可以在凝膠底部小孔徑部分得到分離，所以分子量較大和較小的蛋白質(zhì)可以同時(shí)得到分離。

      2. 梯度凝膠可以分辨分子量相差較小，在單一濃度凝膠中不能分辨的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)在梯度凝膠中遷移，經(jīng)過的孔徑越來越小，直到凝膠的孔徑不能通透，這樣電泳過程中蛋白質(zhì)就被濃縮，集中在一個(gè)很窄的區(qū)帶中。而分子量略小的蛋白質(zhì)可以遷移得更靠前一些，被集中在略前面的區(qū)帶中。由于梯度凝膠孔徑逐步變小，在蛋白質(zhì)不能通透的孔徑附近對(duì)蛋白有濃縮作用，所以電泳后形成很窄的區(qū)帶，可以分辨出分子量相差較小的蛋白質(zhì)。對(duì)于太稀的樣品，在電泳過程中可以將樣品分幾次加樣，大小不同的蛋白質(zhì)分子zui終都會(huì)滯留在其相應(yīng)的凝膠孔徑中而得到分離。

      3. 可以直接測(cè)定天然狀態(tài)蛋白質(zhì)的分子量而不需要解離為亞基，這一方法可以與SDS-PAGE測(cè)定分子量的方法互為補(bǔ)充。
實(shí)驗(yàn)室在自行配制WB所需凝膠時(shí)需準(zhǔn)備很多試劑和材料，包括：

ddH2O，30%丙烯酰胺混合液(29：1，丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺)，1.5M Tris（pH 8.8），1.0M Tris（pH 6.8）,10% SDS，10%過硫酸銨(APS)，N,N,N',N'四甲基二乙胺(TEMED)等。
其中丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體具有神經(jīng)毒性，作用具有累積性； APS也有一定毒性，對(duì)皮膚粘膜有刺激性和腐蝕性；吸入后引起鼻炎、喉炎、氣短和咳嗽等。眼、皮膚接觸可引起強(qiáng)烈刺激、疼痛甚至灼傷?？诜鸶雇础盒暮蛧I吐，長(zhǎng)期皮膚接觸可引起變應(yīng)性皮炎。TEMED對(duì)粘膜和上呼吸道組織及皮膚有很大的破壞作用，具有強(qiáng)神經(jīng)毒性。

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愛必信預(yù)制膠與傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室自行配制凝膠相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

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      2. 不用再接觸丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺，過硫酸銨（APS）以及TEMED等幾種具有積累性神經(jīng)毒性的試劑；

      3. 大規(guī)模生產(chǎn)，膠與膠之間重復(fù)性好，質(zhì)量穩(wěn)定，不像手工灌膠那樣結(jié)果差異大。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

      ★ 高性能：分離能力強(qiáng)，分辨率高；

      ★ 超長(zhǎng)保質(zhì)期：2-8℃可以穩(wěn)定保存一年；

      ★ 兼容性廣：與大多數(shù)市售mini電泳槽兼容，包括：Bio-Rad mini-PROTEAN (Ⅱ/3/Tetra system)，Hoefer Mighty Small (SE 250 / SE 260/ SE 280)，Life Technology Novex Mini-Cell (請(qǐng)與我們申請(qǐng)?zhí)刂茡醢迮涮资褂?。

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產(chǎn)品信息：

愛必信特色產(chǎn)品線：

生化試劑（60萬(wàn)種）、抗體（10萬(wàn)種）、細(xì)胞因子、二抗、ECL發(fā)光液、蛋白marker、激動(dòng)劑、抑制劑、凋亡試劑盒、BSA、動(dòng)植物提取物、蛋白酶K、組化筆...