免疫組化染色步驟:
(以美國ZYMED公司SP試劑盒為例)
石蠟切片脫蠟至水。
3%H2O2室溫孵育5~10分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘,(如需采用抗原修復(fù),可在此步后進行)。
5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉,室溫孵育10分鐘。傾去血清,勿洗,滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小時或4℃過夜。
PBS沖洗,5分鐘×3次。
滴加適當比例稀釋的生物素標記二抗(1%BSA-PBS稀釋),37℃孵育10~30分鐘;或滴加第二代生物素標記二抗工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
PBS沖洗,5分鐘×3次。
滴加適當比例稀釋的辣根酶標記鏈霉卵白素(PBS稀釋),37℃孵育10~30分鐘;或第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液,37℃或室溫孵育10~30分鐘。
PBS沖洗,5分鐘×3次。
顯色劑顯色(DAB或AEC)。
自來水充分沖洗,復(fù)染,封片。
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