国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>技術(shù)參數(shù)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

線粒體復(fù)合體Ⅳ試劑盒(微量法)說明書

來源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2019年02月26日 17:52  

貨號:YJ1172                                      規(guī)格:100管/96樣

線粒體復(fù)合體Ⅳ試劑盒說明書

微量法

正式測定前務(wù)必取 2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C的氧化,并終把電子傳遞給氧,生成水。

測定原理:

還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收,線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C生成氧化型細(xì)胞色素C,因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 100mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑二:液體 20mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:液體 1.5mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑四:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿 600g,4℃離心 5min。

3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11100g,4℃離心 10min。

4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅳ(此步可選做)。

5、步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于復(fù)合體Ⅳ酶活性測定。

測定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至550nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

(1)工作液的配制:臨用前將試劑五和試劑六依次轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解,置于37℃(哺

乳動物)或 25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑 4℃可保存一周;

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和200μL工作液,混勻,立即記錄550nm

處初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,計(jì)算 ΔA=A1-A2。

注意點(diǎn): 若 ΔA 大于0.2,需將樣本用試劑二稀釋適當(dāng)倍數(shù)(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),

使 A1-A2 小于 0.2,可提高檢測靈敏度。

復(fù)合體Ⅳ活力單位的計(jì)算:

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下:

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=1099×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力 (nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d )×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=222×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.444×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.1×10 -4 L;ε:細(xì)胞色素 C 摩爾消光系數(shù),1.91×104 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。

b.使用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下:

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=2198×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力 (nmol/min/g 鮮重 )=[ΔA×V反總÷(ε×d )×109]÷(W×V樣 ÷V樣總)÷T=444×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化降解1nmol還原型細(xì)胞色素C定義為一個(gè)酶活力單位。

復(fù)合體Ⅳ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.888×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.1×10 -4 L;ε:細(xì)胞色素 C 摩爾消光系數(shù),1.91×104 L/mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。

 

神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)說明書

詹納斯綠B染色液(0.2%)說明書

萊克多巴胺快速檢測試劑盒說明書

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
清涧县| 长阳| 朔州市| 汶川县| 盐池县| 介休市| 西充县| 上杭县| 扶风县| 高淳县| 南阳市| 海原县| 时尚| 徐汇区| 东平县| 沂南县| 天峻县| 四子王旗| 南溪县| 大关县| 波密县| 刚察县| 富民县| 什邡市| 百色市| 淅川县| 宁阳县| 沁阳市| 鄄城县| 佳木斯市| 全椒县| 武清区| 白朗县| 怀化市| 姜堰市| 红河县| 襄垣县| 留坝县| 通河县| 腾冲县| 赞皇县|